[发明专利]检测重组人轮状病毒VP8抗原（VP8 P[8]）的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种重组人轮状病毒VP8抗原(VP8P[8])的单克隆抗体及其应用。所述的重组人轮状病毒VP8P[8]抗原的单克隆抗体，其重链可变区(VH)氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区(VL)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体的，涉及一种重组人轮状病毒VP8抗原(VP8 P[8])的单克隆抗体及其应用。

背景技术

轮状病毒是导致全世界范围内儿童、婴儿腹泻的最常见病原体，是引起严重脱水性腹泻的最常见原因，几乎每个孩子在5岁之前都被轮状病毒感染过，对经济造成巨大的损失。

人轮状病毒属于呼肠孤病毒科轮状病毒属，为无包膜RNA病毒，颗粒直径约75nm，由三层二十面体蛋白衣壳组成。其基因组为包含11个节段的双链RNA，编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6、VP7)和5个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5)，內壳蛋白为VP6，核蛋白为VP1、VP2和VP3，最外层由两种蛋白形成，VP4和VP7，其中VP4形成刺突样结构。在轮状病毒感染细胞过程中，VP4蛋白经胰蛋白酶作用，裂解形成VP5*和VP8两个功能多肽片段。VP8蛋白主要参与受体识别，对病毒宿主范围和病毒感染具有重要作用。感染过程中宿主产生的VP8特异性单克隆抗体和抗血清，具有中和病毒的能力，可以阻断病毒与宿主细胞的结合和侵入。

根据VP8核苷酸序列差异，可以将A组轮状病毒分成不同的P基因型，其中P[8]最为常见。

轮状病毒疫苗研发生产过程中对疫苗主要有效成分的质量监控非常重要。酶联免疫吸附试验(ELISA)具有灵敏、快速、耐受性强的优点，可以用于重组人轮状病毒VP8 P[8]抗原生产过程中的质量控制。

基于此，提出本发明。

发明内容

本发明首先涉及一种检测重组人轮状病毒VP8 P[8]抗原的单克隆抗体，其重链可变区(VH)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：

SEQ ID NO.1：

EVQLQQSGPDLVKPGASVKMSCKASGYTFSSFIIHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGSEYNENFKGKATLTSDKSSSTAYMELSTLTSEDSAVYYCSRGGMGNYFDFWGQGTTLTVSS；

轻链可变区(VL)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，

SEQ ID NO.2：

QIVLTQSPALMSASPGEKVTLTCSASSRVNSFYLYWYQQKPGSSPKLWIFGTSNLASGVPARFSGSGSGTSFSLTISTMEAEDAASYFCHQWNFYPFTFGSGTKLEIK。

优选的，所述的单克隆抗体为IgG型抗体，的Fc为鼠源Fc；

所述的重组人轮状病毒VP8 P[8]抗原的氨基酸序列为：

pET-30a(+)-P[8]△VP8*(201重组表达质粒)序列设计

插入氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示：

DKISDVSTIVPYIGPALNI GSGSG LDGPYQPTTFTPPNDYWILINSNTNGVVYESTNNSDFWTAVVAIEPHVNPVDRQYTIFGESKQFNVSNDSNKWKFLEMFRSSSQNEFYNRRTLTSDTRLVGILKYGGRVWTFHGETPRATTDSSSTANLNNISITIHSEFYIIPRSQESKCNEYINNGL

注：

TT632-651前导序列：DKISDVSTIVPYIGPALN