[发明专利]一种总胆汁酸的检测试剂盒

说明书

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种总胆汁酸的检测试剂盒及其。本发明通过在R1中添加聚氧乙烯‑聚氧丙烯共聚物、Span 40和氧化物，在R2中添加EDTA‑Na₂与碳酸氢钠，有效地改善了试剂稳定性和精密度，从而解决检测过程出负值情况。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种总胆汁酸的检测试剂盒。

背景技术

TBA是由肝脏分解代谢，能反映肝实质损伤。一旦肝细胞发生病变，血中胆汁酸浓度极易升高。急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化TBA结果明显升高。与ALT进行比较，急性肝炎、慢性活动性肝炎两项都较敏感，但肝硬化结果差异明显：TBA阳性率高达95％。因此，TBA测定用于监测慢性肝病价值很大，其测定方法简单，是一项很有实用价值的肝功能诊断指标。

1974年挪威科明公司采用的3α-羟基类固醇成功的生产出第一代酶法胆汁酸试剂，使胆汁酸的测定真正进入临床领域，意义重大，如今，胆汁酸的检测已经发展到了第5代循环酶法。现有技术：胆汁酸在3α-羟类固醇(3α-HSD)催化作用下，被β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD+)特异性地氧化，生成3-酮类固醇，同时Thio-NAD+被还原成β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)。新生成的3-酮类固醇在3α-HSD以及NADH的存在下，又被还原成胆汁酸及NAD+。这样，样品中微量的胆汁酸在多次循环过程中被放大，同时使生成的Thio-NADH不断扩增。在405nm处检测反应吸光度，其变化与TBA的浓度成正相关。

TBA+Thio-NAD+(硫代氧化型辅酶)+3α-HSD——3-酮类固醇+Thio-NADH

3-酮类固醇+NADH+3α-HSD——TBA+NAD⁺

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种总胆汁酸的检测试剂盒，该试剂盒可以有效检测血清总胆汁酸的含量，稳定性好，精密度好，同时能够解决低值样本出现负值的问题，假阴性低，检测结果更加准确。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种总胆汁酸的检测试剂盒，由R1试剂和R2试剂组成；

所述R1试剂包括缓冲液、Thio-NAD+、草氨酸钠、甘露醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、Span 40、氧化物和防腐剂；

所述R2试剂包括缓冲液、NADH、BSA、3α-HSD、EDTA-Na2、碳酸氢钠和防腐剂。

一些实施方案中，所述R1试剂包括：

一些实施方案中，所述R2试剂包括：

一些实施方案中，所述R1试剂中，缓冲液为MES缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PBS缓冲液、CAPS缓冲液中的至少一种，缓冲液的pH为8～10。一些具体实施例中，缓冲液为MES缓冲液。

一些实施方案中，所述R1试剂中，氧化物为过氧化叔丁醇、过苯甲酸特丁酯、亚铁氰化钾、亚硝酸钠中的至少一种。一些具体实施例中，所述氧化物为过氧化叔丁醇。

一些实施方案中，所述R1试剂和R2试剂中，防腐剂为NaN3、PC300、PC950、IZU、CAA、BND中的至少一种。一些具体实施例中，防腐剂为NaN3。

一些实施方案中，所述R2试剂中，缓冲液为TAPS缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸缓冲液中的至少一种，缓冲液的pH为3～5。一些具体实施例中，缓冲液为TAPS缓冲液。

一些实施方案中，所述试剂盒由R1试剂和R2试剂组成；

所述R1试剂包括：