[发明专利]制备BRCA2基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统

说明书

本发明公开了制备BRCA2基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统。本发明提供了制备重组猪细胞的方法：将BRCA2‑gRNA1、BRCA2‑gRNA2和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为BRCA2基因发生突变的重组细胞。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示BRCA2‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示BRCA2‑gRNA2和NCN蛋白的试剂盒。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备乳腺癌模型猪；制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。本发明对于乳腺癌药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体属于基因编辑技术领域，更具体涉及制备BRCA2基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统。

背景技术

根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球最新癌症负担数据显示，2020年内新增癌症病例60％来自于最常见的10种肿瘤，其中女性乳腺癌占11.7％，在数量上首次超越了肺癌(11.4％)，成为全球诊断人数最多的癌症。女性乳腺癌第一次成为发病率最高的癌症，是威胁女性健康的第一杀手，也成为了当今最紧迫的健康问题之一。BRCA2是继BRCA1之后发现的家族性乳腺癌/卵巢癌易感基因，其编码产物为一种肿瘤抑制因子。这种保护性蛋白通过同源重组及部分调节Rad51蛋白因子的活性参与双链DNA损伤的修复，从而阻止癌细胞的生长和发育。研究表明，突变的BRCA2基因可导致乳腺癌及卵巢癌的发生风险升高。

研究乳腺癌的发生发展机制及研发相应的药物均需要在动物模型的基础上进行，目前常用的动物模型为小鼠模型，然而小鼠不论从体型、器官大小、生理、病理等方面都与人相差巨大，不能真实地模拟人类正常的生理、病理状态。猪作为大动物，其体型大小和生理功能与人类近似，易于大规模繁殖饲养，而且在伦理道德及动物保护等方面要求较低，是理想的人类疾病模型动物。

基因编辑是近年来不断取得重大发展的一种生物技术，其包括从基于同源重组的基因编辑到基于核酸酶的ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等编辑技术，其中CRISPR/Cas9技术是当前最先进的基因编辑技术。目前，基因编辑技术被越来越多地应用到动物模型的制作上。

发明内容

本发明的目的是提供制备BRCA2基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统。

本发明提供了一种制备重组猪细胞的方法，包括如下步骤：将BRCA2-gRNA1、BRCA2-gRNA2和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。

所述共转染具体采用电击转染的方式。

电击转染的参数设置具体可为：1450V、10ms、3pulse。

所述共转染具体可采用哺乳动物核转染试剂盒(Neon kit,Thermofisher)与NeonTM transfection system电转仪。

本发明还提供了BRCA2-gRNA1、BRCA2-gRNA2和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了BRCA2-gRNA1、BRCA2-gRNA2和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了BRCA2-gRNA1、BRCA2-gRNA2和特异质粒在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了一种试剂盒，包括BRCA2-gRNA1、BRCA2-gRNA2和NCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括BRCA2-gRNA1、BRCA2-gRNA2和PRONCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括BRCA2-gRNA1、BRCA2-gRNA2和特异质粒。

以上任一所述试剂盒还包括猪细胞。