[发明专利]用于保持免疫细胞多样性的培养基和细胞组合物的培养方法

说明书

本发明涉及一种用于保持免疫细胞多样性的培养基，所述培养基含有M‑CSF、laminin、collagen I、collagen IV、抗CD3抗体、抗LILRB2抗体、Heparansulphate、IL‑2、IL‑10、IL‑15、人血浆、vitamin D和AS1842856。本发明还提供了一种具有免疫微环境的细胞组合物的培养方法。通过上述技术方案，本发明提供的用于保持混合细胞群体中免疫细胞多样性的培养基，在培养离体的胸水和/或腹水中分离的混合细胞群体时，能够更好地维持免疫细胞的多样性。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种用于保持免疫细胞多样性的混合细胞群体培养基和一种具有免疫微环境的细胞组合物的培养方法。

背景技术

恶性肿瘤的临床病理表现之一是患者会出现胸水和/或腹水。

胸水和/或腹水中的主要细胞成分中含有大量的肿瘤细胞和免疫细胞，这些免疫细胞和肿瘤细胞形成的混合细胞群体，保留了肿瘤所面临的免疫微环境。其中包含各种T细胞，B细胞，NK细胞和骨髓来源的细胞。这些细胞不仅包括直接或间接参与抗击肿瘤细胞效应细胞，也包括调节肿瘤免疫效应的调节性细胞。

如果将胸水和/或腹水中的免疫细胞提取并加以扩增，可以扩增某种细胞类型，例如T细胞，NK细胞。但是会丢失很多其他细胞类型。例如，CN111286486A公开了一种培养基，所述培养基用于体外扩增恶性肿瘤腹水来源的免疫细胞，其包括：基础培养基以及促增殖因子，所述基础培养基为RPMI-1640，所述促增殖因子由重组人IL-2以及Dynabeads人T细胞激活因子CD3/CD28组成。

但是，目前的免疫细胞的培养基和培养方法所扩增出来的免疫细胞的种类过于简单，缺乏多样性，无法代表真实的免疫微环境，对于肿瘤免疫评价的价值和对肿瘤免疫药物检测的能力非常有限。如何在能够实现一定时间体外培养的前提下，保持混合细胞群体中免疫细胞的多样性，对发现新的肿瘤免疫机制和评价肿瘤免疫药物具有重要价值。

发明内容

本发明的目的是为了增加培养后的免疫细胞的多样性，进而为肿瘤免疫药物筛选和评价提供了更加接近人体的条件。

为了实现上述目的，本发明提供了一种用于保持免疫细胞多样性的培养基（Immunology Microenvironment sustainable medium, IMS培养基），所述IMS培养基含有0.5-50ng/mL的M-CSF、1-50μg/mL的laminin、0.5-2μg/mL的collagen I、0.5-10μg/mL的collagen IV、0.05-0.5μg/mL的抗CD3抗体、5-50μg/mL的抗LILRB2抗体、0.1-1 μg/mL的Heparansulphate、0.5-40U/mL 的IL-2、0.1-20ng/mL的IL-10、0.1-30ng/mL的IL-15、10-50%(w/w)的人血浆、1 -20ng/ml的vitamin D、1nM-100nM的AS1842856。

本发明还提供了一种具有免疫微环境的细胞组合物的培养方法，该方法包括：从离体的胸水和/或腹水中分离混合细胞群体，然后将所分离的混合细胞群体接种至如上所述的培养基中进行培养。

通过上述技术方案，本发明提供的用于保持混合细胞群体中免疫细胞多样性的IMS培养基，在培养离体的胸水和/或腹水中分离的混合细胞群体时，进行一定时间的培养后，还能够较好地维持免疫细胞的多样性，由此可以用于免疫能力检测和免疫药物药效评价。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：

图1是测试实施例1中的细胞活力稳定性折线图。