[发明专利]用于保持免疫细胞多样性的培养基和细胞组合物的培养方法有效
| 申请号： | 202210969740.0 | 申请日： | 2022-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN115044549B | 公开（公告）日： | 2023-02-07 |
| 发明（设计）人： | 孙志坚;康平;肖金平 | 申请（专利权）人： | 北京科途医学科技有限公司;科途（固安）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078;C12N5/09 |
| 代理公司： | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙) 11447 | 代理人： | 董琳 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区经*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 保持 免疫 细胞 多样性 培养基 组合 培养 方法 | ||
1.一种用于保持免疫细胞多样性的培养基，其特征在于，所述培养基含有15ng/mL的M-CSF、10μg/mL的laminin、0.8μg/mL的collagen I、3μg/mL的collagen IV、0.3μg/mL的抗CD3抗体、20μg/mL的抗LILRB2抗体、0.8μg/mL的Heparansulphate、10U/mL的IL-2、3ng/mL的IL-10、10ng/mL的IL-15、20体积%的人血浆、10ng/ml的vitamin D、30nM的AS1842856、50-200U/mL的Penicillin-Streptomycin、1-3mM的L-Glutamine和0.5-2体积%的NEAA。
2.根据权利要求1所述的培养基，其中，所述培养基还含有基础培养基，所述基础培养基为RPMI-1640培养基、MEM培养基、DMEM培养基、IMEM培养基和F12培养基中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的培养基，其中，所述用于保持免疫细胞多样性的培养基为用于保持来源于离体的胸水和/或腹水的免疫细胞多样性的培养基。
4.根据权利要求3所述的培养基，其中，所述胸水和/或腹水为来源于肿瘤患者的胸水和/或腹水。
5.根据权利要求4所述的培养基，其中，所述肿瘤包括肺癌、卵巢癌、胃癌、结肠癌、肝癌、乳腺癌、胰腺癌、胆管癌、食管癌、肾癌、宫颈癌、前列腺癌和黑色素瘤中的至少一种。
6.一种具有免疫微环境的细胞组合物的培养方法，其特征在于，该培养方法包括：从离体的胸水和/或腹水中分离混合细胞群体，然后将所分离的混合细胞群体接种至权利要求1-5中任意一项所述的培养基中进行培养，培养的容器为超低吸附培养皿或超低吸附培养孔板。
7.根据权利要求6所述的培养方法，其中，从离体的胸水和/或腹水中分离混合细胞群体的操作包括：将离体的胸水和/或腹水进行红细胞裂解，然后在200-600×g下离心5-20分钟，收集沉淀；然后将所述沉淀用Accutase蛋白酶或者Dispase II中性蛋白酶进行酶解，得到酶解产物；再将所述酶解产物用孔径为65-75μm的细胞筛过滤，得到滤出的悬液。
8.根据权利要求7所述的培养方法，其中，该培养方法还包括：将所述滤出的悬液进行离心以收集包含肿瘤细胞和免疫细胞的混合细胞群体，并将所收集的混合细胞群体接种到所述培养基中进行培养，培养的容器为超低吸附培养皿或超低吸附培养孔板。
9.根据权利要求6或8所述的培养方法，其中，接种的细胞密度为1-20×106细胞/mL；培养的温度为36-38℃；培养的时间为1-10天。
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