[发明专利]一种表面展示β-半乳糖苷酶的重组毕赤酵母菌的构建方法与应用

权利要求书

1.一种表面展示β-半乳糖苷酶的重组毕赤酵母菌，其特征在于，在原始毕赤酵母Pichia pastoris GS115中异源表达来源于米曲霉BK03的β-半乳糖苷酶基因lacA与来源于酿酒酵母的细胞壁蛋白Flo1p。

2.根据权利要求1所述重组毕赤酵母菌，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶基因lacA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1所述重组毕赤酵母菌，其特征在于，所述细胞壁蛋白Flo1p的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.权利要求1所述重组毕赤酵母菌的构建方法，其特征在于，在原始毕赤酵母Pichiapastoris GS115中导入携带Flo1p和lacA的重组质粒pPIC9k-Flo1p-lacA。

5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，所述重组质粒pPIC9k-Flo1p-lacA核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

6.根据权利要求1～3任一项所述重组毕赤酵母的诱导表达方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将所述重组毕赤酵母菌的种子液接种到BMGY培养基中培养至OD600为2～6；

(2)将步骤(1)培养好的BMGY离心，所得沉淀接种到BMMY培养基中发酵，加入甲醇诱导培养。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，步骤(1)中，所述BMGY培养基：10g/L酵母粉、20g/L蛋白胨、100mL/L磷酸钾母液、2mL/L生物素母液、100mL/L 10％甘油、100mL/L YNB母液，溶剂为纯水。

8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述BMMY培养基：10g/L酵母粉、20g/L蛋白胨、100mL/L磷酸钾母液、2mL/L生物素母液、100mL/L YNB母液、5mL/L甲醇，溶剂为纯水。

9.权利要求1～3中任意一项所述表面展示β-半乳糖苷酶的重组毕赤酵母菌在发酵产低聚半乳糖中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，将所述重组毕赤酵母种子液接种于毕赤酵母发酵培养基中发酵培养，离心收集菌体，然后以乳糖为底物进行细胞转化，得到低聚半乳糖。