[发明专利]一种几丁质酶N端截短突变体及其应用

权利要求书

1.一种N端截短的几丁质酶突变体，其特征在于：所述的几丁质酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

2.一种编码权利要求1所述的几丁质酶突变体的核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子的序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示。

3.一种载体，其特征在于：所述的载体包含权利要求2所述的核酸分子；所述的载体包括质粒、病毒或噬菌体，优选为pET22b。

4.一种宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞包含权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的载体；所述的宿主细胞包括微生物、植物或动物细胞，优选为大肠杆菌。

5.权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的载体或权利要求4所述的宿主细胞在制备几丁质酶突变体中的应用。

6.一种权利要求1所述的几丁质酶突变体的制备方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：

(1)将权利要求2所述的核酸分子与质粒载体连接，得到重组质粒；

(2)将所述重组质粒转化至克隆菌株，得到重组克隆菌株；

(3)提取所述重组克隆菌株中的质粒，转化至表达菌株，得到重组表达菌株；

(4)将重组表达菌株进行诱导培养，收集菌体并破碎，得到几丁质酶。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的载体为pET22b；所述的重组克隆菌株为E.coli DH5α；所述的重组表达菌株为E.coli BL21。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的诱导培养为：将重组表达菌株接入含有氨苄青霉素的第一LB培养基中在36-38℃下培养12-18h，再按照1％v/v的接种量接种至含氨苄青霉素的第二LB培养基中，在36-38℃下培养至OD600＝0.6-0.8，然后加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，于25-30℃，180-200rpm下诱导8-10h。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述的第一LB培养基或第二LB培养基中氨苄青霉素的浓度独立地为98-102mg/mL；所述的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷在第二LB培养基中的终浓度为0.00008-0.00012M。

10.权利要求1所述的几丁质酶突变体在几丁质降解中的应用。