[发明专利]一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法

说明书

本发明公开了一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，包括：0.07g硝酸银溶于400mL去离子水中，在搅拌条件下加热到97℃，0.12g的柠檬酸钠溶于12ml去离子水中后加入，1500转/分钟搅拌加热至沸腾后停止加热，溶液变为绿色后继续搅拌5min，冷却至室温，得到银溶胶，倒出避光保存；取2 mL银溶胶在6500转/分钟条件下离心1min，弃上清液，离心产物5μL与5μL1mM卤盐溶液室温下孵育2h，得到增强基底；取10μL增强基底加入2.5‑10μL的样品充分混合，然后再加入0.5‑4μL10mM的氯化镁充分混合；在激光波长为633nm，扫描时间为35s，激光能量20mW进行SERS检测。本发明能快速识别并区分病毒，无标签检测病毒信号强、灵敏度高且具有通用性。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体来说涉及一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法。

背景技术

目前在全球新冠肺炎大爆发的背景下，特别是在流感季节，呼吸道病原菌感染疾病给医院和患者都造成了极大的压力。目前新冠肺炎有超过2亿人感染，400万人死亡，病毒感染严重危害人类的生命和健康，给全球公共卫生带来了严重的问题。新型冠状病毒（SARS-CoV-2）编码29个蛋白，包括四个关键的结构蛋白：刺突蛋白（Spike protein，S蛋白），核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N蛋白），膜蛋白（Membrane protein，M蛋白）和包膜蛋白（Envelope protein，E蛋白）。虽然SARS-CoV-2的结构是已知的，但到目前为止还没有开发出有效的治疗方法。早期发现、诊断和隔离感染者仍然是对抗新冠肺炎大流行的最重要的控制手段，因此快速检测SARS-CoV-2对预防和治疗相关疾病至关重要。

现有的SARS-CoV-2的检测方法包括免疫学方法和核酸检测方法。免疫学检测方法主要包括间接免疫荧光法、荧光免疫层析法、lgG及lgM 抗体免疫检测和酶联免疫吸附测定（ELISA）。其中ELISA方法具有特异性强，灵敏度高的特点，是免疫学最常用的检测方法。但整体检测时间较长，通量较小，不利于基层大范围展开应用。核酸检测方法主要包括全基因组测序、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、逆转录环介导等温扩增法（RT-LAMP）。qRT-PCR具有高灵敏度，高特异性和低检测限等优点，是世界卫生组织（WHO）推荐的检测的金标准。在实际检测中由于口咽拭子病毒含量较低、病毒RNA易降解等原因，核酸检测常出现假阴性结果。所以，为了避免核酸检测的误差，通常采用免疫学方法来补充SARS-CoV-2检测。

表面增强拉曼散射（SERS）检测生物分子具有非侵入性、敏感性高和特异性强的特点，是一种简单、省时、低成本的检测技术。目前利用SERS技术通常将特定的抗体与具有拉曼活性的增强基底结合，检测目标病毒。然而，增强基底设计复杂、需要特定的探针且价格昂贵，无标签检测病毒无法进入“热点”，检测信号差、灵敏度低且不具有通用性，这种方法不适用于普遍的临床检测。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种快速识别并区分病毒，无标签检测病毒信号强、灵敏度高且具有通用性的基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法。

本发明目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的：

本发明的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，包括以下步骤：