[发明专利]一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法

权利要求书

1.一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，包括以下步骤：

（1）增强基底的合成：a.称取0.07g硝酸银溶于400 mL去离子水中，在搅拌条件下加热到97℃，得A溶液；b.称取0.12g的柠檬酸钠溶于12ml去离子水中，然后加入到上述A溶液中，在1500转/分钟搅拌加热至沸腾后停止加热，溶液变为绿色后继续搅拌5min，冷却至室温，得到B银溶胶倒出避光保存；c.取2 mL上述B银溶胶在6500转/分钟条件下离心1 min，弃上清液，得c产物避光保存；d.取5 μL上述c产物与5 μL1 mM卤盐溶液在室温下孵育2 h，得到增强基底备用；

（2）SERS检测：

①检测条件：a.取10 μL增强基底加入2.5-10μL的样品充分混合，然后再加入0.5-4μL的氯化镁（10 mM）充分混合；b.在激光波长为633 nm，扫描时间为35s，激光能量20 mW进行SERS检测；

②常规病毒获取和制备：

③无标签检测病毒的SERS信号。

2.如权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，其中：步骤（1）所述加入上述A溶液中还可以为直接倒入上述A溶液中或滴加速度为8-12滴/秒加入上述A溶液中。

3.如权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，其中：步骤（1）中所述的卤盐溶液为氯化钾溶液、溴化钾溶液、氯化钠溶液或溴化钠溶液。

4.如权利要求1-3之一所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，其中：步骤（2）中③无标签检测在较高温度下病毒的SERS信号为将所需滴度的病毒加入胎牛血清中(或人工唾液)，浓度为从1×105 拷贝数 /ml稀释至2 × 10⁴ 拷贝数 /ml，含有病毒的血清（或唾液）在56℃下反应30 min，进行拉曼检测。

5.如权利要求1-3之一所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，其中：步骤（2）中③无标签检测在较高温度下病毒的SERS信号为每种相同浓度病毒1000个SERS光谱组作为LDA 变量，所有光谱用labspec6进行基线校正和归一化处理，LDA是在R环境中使用FactomineR包执行的；利用误差椭圆函数将拉曼光谱按载荷比例投影到得分图上，绘制出95%置信区间的误差椭圆，LDA确定病毒拉曼光谱的主要差异，并对线性判别分析得到的数据进行分类；

通过SARS-CoV-2、HAdV 7、和H1N1三种病毒的SERS光谱识别并区分三种病毒，含有病毒的唾液进行检测，通过特征峰的位置和强度可以在唾液中识别这三种病毒，结合LDA技术分析拉曼光谱，LDA生成多个不同坐标值的点，每种病毒都有一个清晰的，不重叠的95%置信椭圆，LDA方法可以准确区分唾液中引起感染的病毒。

6.如权利要求1-3之一所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测病毒的方法，其中：步骤（2）中③无标签检测在较高温度下病毒的SERS信号为每种相同浓度病毒1000个SERS光谱组作为LDA 变量，所有光谱用labspec6进行基线校正和归一化处理，LDA是在R环境中使用FactomineR包执行的；利用误差椭圆函数将拉曼光谱按载荷比例投影到得分图上，绘制出95%置信区间的误差椭圆，LDA确定病毒拉曼光谱的主要差异，并对线性判别分析得到的数据进行分类；

通过SARS-CoV-2、HAdV 7、和H1N1三种病毒的SERS光谱识别并区分三种病毒，含有病毒的血清进行检测，在血清中可以清晰的观察到三种病毒的特征峰，通过特征峰的位置和强度可以在血清中识别这三种病毒；结合LDA技术分析拉曼光谱，LDA生成多个不同坐标值的点，每种病毒都有一个清晰的，不重叠的95%置信椭圆，LDA方法可以准确的区分血清中引起感染的病毒。