[发明专利]一种双标记劈裂适配体探针及其在无酶扩增一步法快速检测双酚A中的应用

权利要求书

1.一种双标记劈裂适配体探针，其特征在于，所述探针包含第一探针和第二探针；

其中，

所述第一探针其具有如SEQ ID NO.2、4、6中任意任一项或多项所示的核苷酸序列；

所述第二探针其具有如SEQ ID NO.3、5、7中任意任一项或多项所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的双标记劈裂适配体探针，其特征在于，所述第一探针修饰有猝灭基团，所述第二探针修饰有荧光基团；

优选的，所述猝灭基团修饰于第一探针的3’端和/或5’端；

优选的，所述荧光基团修饰于第二探针的5’端和/或3’端。

3.如权利要求2所述的双标记劈裂适配体探针，其特征在于，所述猝灭基团为BHQ₂，所述荧光基团为FAM。

4.如权利要求1所述的双标记劈裂适配体探针，其特征在于，第一探针和第二探针其摩尔比为0.1-10:1，优选为0.8-2:1，进一步优选为1.2:1；

进行检测时，所述第一探针的浓度为0.1-5μM，优选为0.5-2.5μM，进一步优选为1.0μM。

5.一种双酚A检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含权利要求1-4任一项所述双标记劈裂适配体探针。

6.如权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中还包含反应缓冲液；

优选的，所述反应缓冲液包含Mg²⁺；所述Mg²⁺浓度为0-20mM，进一步优选为15mM；

所述反应缓冲液pH为弱碱性，优选为7.2-8.0，进一步优选为7.8。

7.权利要求1-4任一项所述双标记劈裂适配体探针或权利要求5或6所述检测试剂盒在检测双酚A中的应用。

8.如权利要求7所述应用，其特征在于，应用领域包括食品、环境和医学领域；

优选的，所述食品领域包括饮品(包括果汁)以及食品包装制品(包括塑料制品)。

9.一种检测双酚A的方法，其特征在于，所述方法包括：将待测样品与权利要求1-4任一项所述双标记劈裂适配体探针混合得混合溶液，并进行孵育，然后进行荧光测定。

10.如权利要求9所述方法，其特征在于，所述孵育时间为1-10min，优选为5min；

所述荧光测定具体方法为：在488nm激发波长条件下，控制荧光范围为510-600nm进行荧光测定。