[发明专利]一种灭活新冠病毒液的纯化方法

说明书

本发明公开了一种灭活新冠病毒液的纯化方法，通过使用阴离子交换柱作为SARS‑COV‑2灭活病毒的粗纯捕获填料，分子筛填料作为精纯填料，并优化粗纯和精纯的工艺参数，得到了高质量的灭活新冠病毒液。本发明一些实例的纯化方法，抗原回收率在50％～60％之间，最终产品HCP去除率在94.5％～99.0％之间，DNA去除率在95.5％～99.5％之间。试验结果表明，各批次层析实验中抗原回收率稳定与杂质去除率符合要求。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种灭活新冠病毒液的纯化方法。

背景技术

SARS-COV-2病毒直径在75～160nm的β冠状病毒，主要有4种结构蛋白，分别为S(棘突)蛋白、N(核衣壳)蛋白、M(膜)蛋白以及E(包膜)蛋白。其中，S蛋白是病毒最重要的表面膜蛋白，也是引起免疫应答的重要抗原，是疫苗设计的关键靶点。因此，高效、快速地完成病毒纯化同时减少表面S蛋白的损伤对制备灭活疫苗至关重要。

CN111575249A公开了一种新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒液的纯化方法。该方法包括：将灭活的病毒液通过滤膜初步过滤，然后通过滤膜超滤浓缩得到新型冠状病毒浓缩液；加入核酸酶，降解Vero细胞中残留的DNA；将复合填料Capto Core 700装入层析柱中，先采用碱液冲洗，再用洗脱液平衡2～5个柱体积，接着将病毒浓缩液泵入到层析柱中，洗脱液洗脱；在紫外检测波长280nm条件下，收集第一个流穿峰即为病毒纯化液。本发明采用超滤浓缩、核酸酶消化和柱层析工艺步骤，结合复合填料Capto Core 700对新型冠状病毒液进行纯化，能够快速、稳定地大规模生产新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒纯化液。

现有的灭活新冠病毒液的纯化方法操作相对比较复杂，有待进一步改善。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种灭活新冠病毒液的纯化方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种灭活新冠病毒液的纯化方法，包括如下步骤：

将灭活SARS-COV-2病毒液澄清过滤，除去细胞碎片，得澄清病毒液；

将澄清病毒液超滤浓缩换液，得到灭活病毒浓缩液；

粗纯层析：使用阴离子交换柱作为SARS-COV-2灭活病毒的粗纯捕获填料，捕获条件为：10-30mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.05-0.25mol/l NaCl，pH6.8-7.8；洗杂条件为：10-30mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.25-0.40mol/l NaCl，pH6.8-7.8；洗脱条件为：10-30mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.50-80mol/l NaCl，pH6.8-7.8，得粗纯灭活病毒液；

精纯层析：分子筛填料作为精纯填料，平衡、洗脱条件为：10-30mmol/l P.B缓冲液，0.10-40mol/l NaCl，pH7.4，得纯化灭活新冠病毒液。

在一些纯化方法的实例中，使用0.45～1μm滤膜对灭活SARS-COV-2病毒液澄清过滤。

在一些纯化方法的实例中，超滤的截留分子量为100KD～300KD。

在一些纯化方法的实例中，粗纯层析时，动态载量为20-60ml粗纯灭活病毒液/mlGel。

在一些纯化方法的实例中，粗纯层析时，

态载量为40ml粗纯灭活病毒液/ml Gel；和/或

捕获条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.15mol/l NaCl，pH7.4；和/或

洗杂条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.30mol/l NaCl，pH7.4；和/或