[发明专利]一种灭活新冠病毒液的纯化方法在审
| 申请号： | 202210912943.6 | 申请日： | 2022-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN115305242A | 公开（公告）日： | 2022-11-08 |
| 发明（设计）人： | 艾文;林如新;伍磊健;陈春英;王亚玲;周平平;袁润余;孙九峰 | 申请（专利权）人： | 广州瑞贝斯药业有限公司;广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院;广东省公共卫生研究院 |
| 主分类号： | C12N7/02 | 分类号： | C12N7/02 |
| 代理公司： | 广州市诺丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44714 | 代理人： | 许飞 |
| 地址： | 510663 广东省广州市黄*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 灭活新冠病 毒液 纯化 方法 | ||
1.一种灭活新冠病毒液的纯化方法，包括如下步骤：
将灭活SARS-COV-2病毒液澄清过滤，除去细胞碎片，得澄清病毒液；
将澄清病毒液超滤浓缩换液，得到灭活病毒浓缩液；
粗纯层析：使用阴离子交换柱作为SARS-COV-2灭活病毒的粗纯捕获填料，捕获条件为：10-30mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液， 0.05-0.25mol/l NaCl，pH6.8-7.8；洗杂条件为：10-30mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.25-0.40mol/l NaCl，pH6.8-7.8；洗脱条件为：10-30mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.50-80mol/l NaCl，pH6.8-7.8，得粗纯灭活病毒液；
精纯层析：分子筛填料作为精纯填料，平衡、洗脱条件为：10-30mmol/l P.B缓冲液，0.10-40mol/l NaCl，pH7.4，得纯化灭活新冠病毒液。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，使用0.45～1μm滤膜对灭活SARS-COV-2病毒液澄清过滤。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，超滤的截留分子量为100 KD～300KD。
4.根据权利要求1～3任一项所述的纯化方法，其特征在于，粗纯层析时，动态载量为20-60ml粗纯灭活病毒液/ml Gel。
5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，粗纯层析时，
态载量为40ml粗纯灭活病毒液/ml Gel；和/或
捕获条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.15mol/l NaCl，pH7.4；和/或
洗杂条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.30mol/l NaCl，pH7.4；和/或
洗脱条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.65mol/l NaCl，pH7.4。
6.根据权利要求1～3任一项所述的纯化方法，其特征在于，精纯层析时，载量为30-200%柱体积。
7.根据权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，精纯层析时，载量为50%柱体积。
8.根据权利要求1～3任一项所所述的纯化方法，其特征在于，精纯层析时，平衡、洗脱条件为：20 mmol/l P.B缓冲液，0.15mol/l NaCl，pH7.4。
9.根据权利要求1～3任一项所述的纯化方法，其特征在于，灭活病毒浓缩液中，蛋白的浓度为0.5～1.5 g/L。
10.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
使用0.45～1μm滤膜将灭活SARS-COV-2病毒液澄清过滤，除去细胞碎片，得澄清病毒液；
将澄清病毒液超滤浓缩换液，超滤的截留分子量为100KD～300 KD，得到蛋白的浓度为0.5～1.5 g/L的灭活病毒浓缩液；
粗纯层析：使用阴离子交换柱作为SARS-COV-2灭活病毒的粗纯捕获填料，捕获条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.15mol/l NaCl，pH7.4；洗杂条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.30mol/l NaCl，pH7.4；洗脱条件为：20mmol/L P.B或Tris-HCl缓冲液，0.65mol/l NaCl，pH7.4，得粗纯灭活病毒液；
精纯层析：分子筛填料作为精纯填料，载量为50%柱体积，平衡、洗脱条件：20 mmol/lP.B缓冲液，0.15mol/l NaCl，pH7.4，得纯化灭活新冠病毒液。
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