[发明专利]适用于哺乳动物细胞表达系统的高活性和高热稳定性荧光素酶突变体

权利要求书

1.一种萤火虫荧光素酶突变体，其特征在于，所述萤火虫荧光素酶经过哺乳动物密码子优化，其野生型密码子优化后的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；所述突变体包括双突变位点T214N T290P、T214N K28R和A532R T214N中的至少一个；

所述T214N T290P为第214和第290位的苏氨酸分别突变为天冬酰胺和脯氨酸；

所述T214N K28R为第214和第28位的苏氨酸和赖氨酸分别突变为天冬酰胺和精氨酸；

所述A532R T214N为第214和第532位的苏氨酸和丙氨酸分别突变为天冬酰胺和精氨酸。

2.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3-5所示。

3.一种编码权利要求2所述的萤火虫荧光素酶突变体的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6-8所示。

4.一种含有权利要求3所述的基因的重组载体、重组菌或蛋白表达宿主细胞。

5.根据权利要求4所述的重组载体、重组菌或蛋白表达宿主细胞，其特征在于，所述的重组载体是通过将包含密码子优化Luc基因的载体进行定点突变得到，所述定点突变是通过反向PCR将密码子优化后的北美萤火虫荧光素酶P.Pyralis luciferase基因上第214和第290位的苏氨酸密码子分别改变成天冬酰胺和脯氨酸的密码子，第214和第28位的苏氨酸和赖氨酸密码子分别改变成天冬酰胺和精氨酸的密码子，或第214和第532位的苏氨酸和丙氨酸密码子分别改变成天冬酰胺和精氨酸的密码子；

所述的重组菌是将上述的重组载体转化进入大肠杆菌stbl3中得到；

所述的蛋白表达宿主细胞是将上述的重组载体转入293细胞中得到。

6.权利要求1或2所述的突变体，权利要求3所述的基因，权利要求4所述的表达载体重组载体、重组菌或蛋白表达宿主细胞在制备荧光素酶检测试剂中的应用。