[发明专利]一种质粒载体及展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒的制备方法

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种质粒载体及展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒的制备方法。本发明提供的质粒载体的特征在于：该质粒载体依次含有阿拉伯糖启动子，MS2CP基因、琥珀密码子、Linker序列、外源蛋白基因插入部分、His标签编码序列、MS2噬菌体包装序列、锤头酶序列和编码MS2噬菌体成熟蛋白序列。通过该质粒载体可以制备表面展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒，可应用于MS2噬菌体亚单位疫苗的制备。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及质粒载体及展示外源蛋白的噬菌体类似颗粒的制备方法。

背景技术

病毒样颗粒(Virus like particles，VLPs)是由多个病毒的一种或几种结构蛋白组装而成的大颗粒，不含病毒核酸，不能进行自主复制，具有与病毒颗粒类似的整体结构。VLPs由于具有安全性高，在结构上与病毒粒子相似，可通过与病毒粒子相同的途径激起免疫系统的有效应答等优点，近二十年来在人用、兽用疫苗及药物递送系统中的应用越来越受到关注。

病毒样颗粒(VLPs)具高安全性和有效性，代表了亚单位疫苗开发的重大进步。病毒样颗粒(VLPs)的颗粒性质和密集的重复亚基组织使它们成为展示疫苗抗原的理想支架，因可以呈现病原体关键抗原特征而具有很好的免疫原性常用作特定类型的亚单位疫苗。但VLP的抗原展示的往往需要精心设计并劳动密集型的试错优化。另外，纯化展示抗原的VLP步骤也比较繁琐沉淀，往往需要沉淀，过滤，或超高速离心。

大肠杆菌MS2噬菌体是二十面体的单链正义RNA病毒，可感染大肠杆菌和肠杆菌科的其他成员，其基因组含有3569个核苷酸，同时作为mRNA编码4中蛋白质，包括成熟酶蛋白(A蛋白)、衣壳蛋白(CP)、复制酶蛋白(Rep)和裂解蛋白(Lys)。成熟酶蛋白和衣壳蛋白能与外源ssRNA中特定茎环结构(称为pac位点)相互作用，自发包装形成不具有侵染活性的病毒颗粒，这里称之为MS2-VLPs。MS2-VLPs应用广泛，这些颗粒能够模拟ssRNA病毒，在疫苗、药物传递系统和免疫活性多肽显示系统或纳米机器等多个领域，可以作为分子检测、过程控制以及定量分析的参照物。

发明内容

本发明开发一种质粒载体，通过该质粒载体可以制备表面展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒，可应用于MS2噬菌体亚单位疫苗的制备。同时，在外源蛋白的羧基端引入His标签，便于快速简洁纯化表面展示蛋白的VLP。

本发明提供的质粒载体的特征在于：该质粒载体依次含有阿拉伯糖启动子，MS2CP基因、琥珀密码子、Linker序列、外源蛋白基因插入部分、His标签编码序列、MS2噬菌体包装序列、锤头酶序列和编码MS2噬菌体成熟蛋白序列。

具体的，所述MS2 CP基因，无终止密码子，编码的蛋白为GenBank:AZS06102.1，如SEQ ID NO.1所示。

具体的，所述琥珀密码子为TAG。

具体的，所述Linker序列，编码的蛋白序列以甘氨酸和丝氨酸为主，长度超过15个氨基酸。

具体的，外源蛋白基因插入部分有酶切位点，方便外源序列的克隆到载体上。

具体的，所述His标签编码序列，编码连续6个以上组氨酸。

优选的，上述His标签编码序列编码8-10个组氨酸。

具体的，所述MS2噬菌体包装序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

具体的，所述锤头酶序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。

具体的，所述编码MS2噬菌体成熟蛋白序列如SEQ ID NO.6所示。

具体的，所述MS2噬菌体包装序列和所述锤头酶序列之间加入10bp以上随机序列。