[发明专利]一种质粒载体及展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒的制备方法在审
| 申请号： | 202210876094.3 | 申请日： | 2022-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN116376948A | 公开（公告）日： | 2023-07-04 |
| 发明（设计）人： | 周于婷;欧阳永长 | 申请（专利权）人： | 广州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/65;C12N15/40;C07K14/08;C07K1/22 |
| 代理公司： | 广东深宏盾律师事务所 44364 | 代理人： | 陈俊 |
| 地址： | 511436 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 质粒 载体 展示 蛋白 ms2 噬菌体 类似 颗粒 制备 方法 | ||
1.一种质粒载体，其特征在于：该质粒载体依次含有阿拉伯糖启动子，MS2 CP基因、琥珀密码子、Linker序列、外源蛋白基因插入部分、His标签编码序列、MS2噬菌体包装序列、锤头酶序列和编码MS2噬菌体成熟蛋白序列。
2.如权利要求1所述的质粒载体，其特征在于：所述MS2 CP基因，无终止密码子，编码的蛋白为GenBank:AZS06102.1，如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求1所述的质粒载体，其特征在于：所述Linker序列，编码的蛋白序列以甘氨酸和丝氨酸为主，长度超过15个氨基酸。
4.如权利要求1所述的质粒载体，其特征在于：外源蛋白基因插入部分有酶切位点。
5.如权利要求1所述的质粒载体，其特征在于：所述His标签编码序列，编码连续6个以上组氨酸。
6.如权利要求1所述的质粒载体，其特征在于：所述MS2噬菌体包装序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。
7.如权利要求1所述的质粒载体，其特征在于：所述锤头酶序列如SEQ ID NO.4或SEQID NO.5所示；所述编码MS2噬菌体成熟蛋白序列如SEQ ID NO.6所示。
8.如权利要求1所述的质粒载体，其特征在于：所述MS2噬菌体包装序列和所述锤头酶序列之间加入10bp以上随机序列。
9.如权利要求8所述的质粒载体，其特征在于：所述随机序列如SEQ ID NO.7所示。
10.展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)采用权利要求1-9提供的任一质粒载体插入外源蛋白基因X后，转入琥珀密码子抑制宿主中表达；
(2)离心诱导表达后的菌液，得到菌体，破碎菌体，释放宿主内蛋白，离心取沉淀获得上清；
(3)上清经离子亲和层析纯化得到表面展示X蛋白的MS2噬菌体样颗粒。
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