[发明专利]用于鉴别六个冬青品种的引物组合及方法

说明书

本发明提供一种用于鉴别不同冬青品种的引物组合及鉴别方法。所述引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4、SEQ ID NO.5‑6、SEQ ID NO.7‑8、SEQ ID NO.9‑10、SEQ ID NO.11‑12和SEQ ID NO.13‑14所示。本发明提供一组基于所述引物的PCR检测方法，该方法以‘Wirt L.Winn’、代茶冬青、大别山冬青、中型冬青、钝齿冬青和狭冠冬青的DNA为模板，利用不同的退火温度进行扩增，并根据扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果鉴别不同冬青品种。本发明引物特异性好，准确的高，可为冬青的实际生产和销售带来便利，同时该操作方法简单，且成本低廉。

技术领域

本申请涉及生物检测领域，具体地说涉及对冬青品种资源进行检测的引物组合及PCR检测方法。

背景技术

冬青属（ Ilex）植物为冬青科（Aquifoliaceae）常绿或落叶乔木或灌木，优良的冬青品种具有生长速度快、适应能力强、树姿优美，枝叶繁茂，果色鲜亮等观赏价值，还有些冬青品种的树根、枝、叶及树皮可入药，具有很高经济价值和生态价值。现在，随着人民生活水平的提高，对环境的要求也越来越高。因此，一些优良的冬青品种更广泛地被应用在道路、公园、庭院、校园环境的美化中。

许多优良的冬青品种是通过扦插的方式进行繁殖，在苗木的工厂化生产过程中，如果保障品种树苗的一致性，以及如何保障出圃苗木的质量，成为目前冬青苗木生产、销售中面临的亟待解决的问题。

目前，已有越来越多的植物物种界定、纯度鉴定和品种鉴别是通过叶绿体基因组中的遗传多样性来分析解决的。‘Wirt L. Winn’、代茶冬青、大别山冬青、中型冬青、钝齿冬青和狭冠冬青是较为常见的冬青品种，本发明旨在利用叶绿体基因组中的多态性位点为标记，设计引物，为这6个冬青品种提供高效、精准的鉴别方法，从而解决生产和销售过程中的面临的纯度检测及品种鉴别问题。

发明内容

本申请提供了一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用，以解决目前没有快速、准确鉴别冬青的品种的技术问题。

本申请提供了用于鉴别冬青品种的引物组合，所述引物组合包括引物组A，所述引物组A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。

所述引物组合还包括引物组B，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。

所述引物组合还包括引物组C，所述引物组C的核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示。

所述引物组合还包括引物组D，所述引物组D的核苷酸序列如SEQ ID NO.7-8所示。

所述引物组合还包括引物组E，所述引物组E的核苷酸序列如SEQ ID NO.9-10所示。

所述引物组合还包括引物组F，所述引物组F的核苷酸序列如SEQ ID NO.11-12所示。

所述引物组合还包括引物组G，所述引物组G的核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示。

本申请提供了所述的引物组合在检测冬青品种方法中的应用。

本申请提供了检测冬青品种的方法，所述方法包括使用所述的引物组合，并通过对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后的条带进行判断。

可选的，所述扩增反应包括变性、退火和引物延伸；所述变性的温度为98℃；所述退火的温度为55-61℃；所述引物延伸的温度为72℃。

可选的，所述扩增产物使用2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电压120v，时间25-30min。

本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：