[发明专利]一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用在审
| 申请号： | 202210856638.X | 申请日： | 2022-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN115948477A | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 牟彦双;刘忠华;郭晓晨;耿立爽;姜超前 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N5/10;C12N15/12 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 王志新 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 crispr cas9 同源 重组 修复 效率 诱导剂 方法 以及 应用 | ||
1.一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂，其特征在于，所述诱导剂为M3814。
2.权利要求1所述的诱导剂在提高CRISPR/Cas9介导的编辑猪成纤维细胞的同源重组修复效率中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述M3814的有效浓度为0.1-2μM。
4.一种提高CRISPR/Cas9介导的同源重组修复效率的方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：将GenCrispr NLS-Cas9-NLS Nuclease，sgRNA和ssODN共转染到猪细胞中，添加M3814处理共转染后的猪细胞，培养至少72小时。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述M3814的浓度为0.1-2μM。
6.根据根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述猪细胞为猪成纤维细胞；所述ssODN为经过硫代修饰。
7.权利要求4-6任一项所述的方法在编辑INS位点中的应用，其特征在于，对于1×106细胞，将10μg GenCrispr NLS-Cas9-NLS Nuclease、100pmol sgRNA-INS在室温下预混10min，加入ssODN-INSA54T-M或ssODN-INSA54T，用optiMEM补至20μL，然后进行电转到猪细胞中。
8.权利要求4-6任一项所述的方法在提高CRISPR/Cas9介导的编辑单基因或多基因的单位点或多位点的基因突变效率中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述多基因为INS和RLN3；所述单基因为INS或RLN3；所述基因突变为碱基替换。
10.权利要求4-6任一项所述的方法在提高CRISPR/Cas9介导的人源化修饰中的应用。
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