[发明专利]一种仿乙型脑炎病毒纳米药物及其制备和应用

说明书

本发明构建了一种仿乙型脑炎病毒纳米药物(JEV‑mimicking nanodrugs，HCQ@aPDL1‑Viro)及其制备和应用，以脂质体为框架，所述脂质体表面修饰日本脑炎病毒膜蛋白和PDL1抗体，脂质体框架内部包封羟氯喹。本发明的纳米药物能够封锁免疫检查点重塑免疫抑制微环境，激活免疫细胞活性。同时该纳米载体还能够上调细胞自噬水平，通过膜融合机制释放抑制剂，阻断自噬通量，导致细胞失去稳态发生凋亡。该发明的纳米药物在封锁免疫检查点、上调自噬水平和阻断自噬通量的三重功效的协同作用下，显著提高了抗肿瘤疗效，并为肿瘤治疗提供了一种潜在的治疗策略。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗技术领域，尤其是涉及一种仿乙型脑炎病毒纳米药物及其制备和应用。

背景技术

程序性死亡蛋白1(Programmed death protein 1,PD-1)是T细胞表面一种常见的免疫抑制蛋白，在下调免疫系统和提高自我耐受中发挥不可或缺的作用。而肿瘤细胞选择性过表达其配体PD-L1，会抑制T细胞的功能，使其无法杀死肿瘤细胞，导致肿瘤免疫逃逸。近年来，使用PD-1/PD-L1单克隆抗体阻断免疫检查点癌症免疫疗法已经彻底改变了多种恶性肿瘤的临床效果。然而，单独阻断PD-1/PD-L1信号往往不足以逆转肿瘤免疫抑制微环境，完全清除肿瘤细胞，从而导致该免疫治疗在很大一部分患者中是无效的。因此，急需将PD-1/PD-L1单克隆抗体与协同药物相结合，开发更有效的联合疗法，进一步提高肿瘤免疫治疗的有效性。

自噬是一种进化保守的细胞过程，通过将受损的细胞器、错误折叠的蛋白质和其他大分子运输到溶酶体降解和重复利用，在细胞生存、细胞代谢和免疫应答中发挥关键作用。其中，自噬体与溶酶体的融合是自噬通量中的一个关键步骤。自噬通量的阻断会导致异常蛋白聚集的积累和线粒体功能障碍，促进氧化应激和细胞凋亡。越来越多的证据表明，癌细胞可以通过自噬增强自身代谢，抑制细胞死亡途径，从而促进肿瘤细胞存活。研究发现PD-L1/PD-1封锁后，会刺激肿瘤细胞的自噬水平进一步提高，从而促进细胞生存能力，降低免疫治疗的有效性。因此，阻断PD-L1/PD-1相互作用，同时抑制肿瘤细胞通过自噬增强自身代谢途径(自噬通量)，有望提高PD-1/PD-L1检查点封锁癌症免疫治疗的疗效。

乙型脑炎病毒(JEV，也称日本乙型脑炎或流行性乙型脑炎)是一种具有正链RNA基因组的包膜黄病毒，糖蛋白E介导JEV的感染进入，与细胞表面的受体结合，并在低pH下病毒包膜与熟化内体膜融合释放基因组。最近有报道发现，JEV感染可上调细胞自噬水平，促进细胞存活，延长繁殖和复制时间。值得注意的是，JEV可以逃避溶酶体降解而实现基因组胞质释放，这一机制可以使药物逃脱溶酶体降解的命运，最大限度地提高药物的递送效率，解决了一直以来药物递送面临溶酶体降解的难题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提出一种仿乙型脑炎病毒纳米药物及其制备和应用，纳米药物表面偶联的PDL1抗体为免疫检查点封锁剂，可以激活T细胞免疫活性，改善免疫抑制微环境；同时和病毒膜蛋白为自噬诱导剂，能够刺激肿瘤细胞自噬水平上调，有利于肿瘤细胞的生存；羟氯喹HCQ为自噬通量抑制剂，能够阻断刺激后肿瘤细胞中高水平的自噬通量，肿瘤细胞无法代谢，导致失去稳态，从而发生凋亡。总得来说，该纳米药物具有封锁免疫检查点、提高细胞自噬及阻断自噬通量的三重作用来增肿瘤治疗效果。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种仿乙型脑炎病毒纳米药物，以脂质体为框架，所述脂质体表面修饰乙型脑炎病毒膜蛋白和PDL1抗体，同时内部包封有羟氯喹。

纳米药物的脂质体成分是哺乳动物细胞质膜(OPM)外层的脂质成分，脂质体为天然膜成分，具有优异的生物相容性，PDL1抗体为免疫检查点封锁剂，同时和乙型脑炎病毒膜蛋白为自噬诱导剂，羟氯喹HCQ为自噬通量抑制剂。

优选地，所述纳米药物的水合粒径为10-200nm，更优选地，所述纳米药物的水合粒径为120-160nm。