[发明专利]具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物及体外培养的方法有效
| 申请号： | 202210846301.0 | 申请日： | 2022-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN115125204B | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 赵献军;魏强;马樱琬;田方杰;白春娜;张翊华 | 申请（专利权）人： | 百欧派（天津）生物技术有限公司;西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 赵泽丽 |
| 地址： | 300350 天津市津南*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 具有 自然 杀伤 细胞 体外 激活 功能 组合 培养 方法 | ||
1.一种犬自然杀伤细胞的体外培养方法，其特征在于，该方法包括：将犬外周血单个核细胞与具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物混合进行激活培养，将激活培养后的细胞进行分离和扩增；
其中，具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物由RPMI-1640培养基、胎牛血清、灭活的A群链球菌(Streptococcus pyogenes)、糖皮质激素、人白介素2、人白介素15、CD335单克隆抗体和CD16单克隆抗体组成；具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物中，RPMI-1640培养基和胎牛血清的体积比为9：1，相对于总量为1mL的RPMI-1640培养基和胎牛血清，所述灭活的A群链球菌的含量为0.01KE、糖皮质激素的含量为3.7μg、人白介素2的含量为100IU、人白介素15的含量为10ng、CD335单克隆抗体的含量为50ng、CD16单克隆抗体的含量为50ng；所述糖皮质激素为氢化可的松；
所述扩增使用的培养液由人白介素2、人白介素15、RPMI-1640培养基和胎牛血清组成；所述扩增使用的培养液中，RPMI-1640培养基和胎牛血清的体积比为9：1，相对于总量为1mL的RPMI-1640培养基和胎牛血清，人白介素2的含量为1000IU；人白介素15的含量为10ng。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述灭活的A群链球菌为沙培林。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述具有犬自然杀伤细胞体外激活功能的组合物的用量使得犬外周血单个核细胞在混合体系中的初始细胞密度≥3×106个细胞/mL。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述激活培养的条件包括：饱和湿度，温度为36-38℃，CO2含量为5-10％。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述扩增的条件包括：饱和湿度，温度为36-38℃，CO2含量为5-10％。
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