[发明专利]通过在离散实体中条形码化对核酸进行测序

权利要求书

1.一种向离散实体中引入多个拷贝的核酸条形码序列的方法，所述方法包括：

将多个核酸靶分子包封在离散实体中；

使所述离散实体流入接合点；

使包含珠粒的液流流向接合点，所述珠粒包含多个拷贝的核酸条形码；

使所述离散实体合并到所述液流中；并且

诱导所述液流破裂包含多个核酸靶分子的离散实体和包含多个拷贝的核酸条形码的珠粒。

2.如权利要求1所述的方法，其中将多个核酸靶分子包封在离散实体中包括在中间产物液滴中裂解细胞，从而将细胞的核酸靶分子包封在中间产物液滴中。

3.如权利要求1所述的方法，其中多个拷贝的第一核酸条形码锚定在至少一个包括珠粒的固体衬底上。

4.如权利要求3所述的方法，其中合并包括使用电场来将离散实体合并成连续不分节的试剂流。

5.如权利要求1所述的方法，还包括使连续不分节的试剂流在产生滴落的条件下流动，同时将离散实体合并成试剂流。

6.如权利要求1所述的方法，还包括使连续不分节的试剂流在喷射条件下流动，同时将离散实体合并成连续不分节的试剂流。

7.如权利要求1所述的方法，还包括使第一核酸条形码的拷贝酶促并入到单个微滴中的核酸靶分子中，并且合成用第一核酸条形码标记的核酸靶分子的互补序列。

8.如权利要求7所述的方法，其中合成互补序列包括扩增。

9.如权利要求7所述的方法，其中合成互补序列包括逆转录。

10.如权利要求7所述的方法，其中合成包括微滴内合成。

11.如权利要求1所述的方法，其中多个拷贝的第一条形码序列各自包括相应的独特分子标识符。

12.如权利要求1所述的方法，还包括在包封之前用独特分子标识符标记多个核酸靶分子。

13.如权利要求12所述的方法，其中第一核酸条形码的序列长度大于独特分子标识符。

14.如权利要求12所述的方法，还包括在包封之前扩增包括独特分子标识符的多个核酸靶分子。

15.如权利要求1所述的方法，还包括：

在接合点，使来自第一通道的离散实体与来自第二通道的连续不分节的试剂流的第一侧接触，并且使来自第三通道的载液与来自第二通道的连续不分节的试剂流接触。

16.如权利要求1所述的方法，还包括：

在使离散实体合并到连续不分节的试剂流中之前，使与接合点下游的连续不分节的试剂流接触的离散实体同向流动。