[发明专利]一种基于血液循环肿瘤细胞的宫颈癌放疗敏感性检测方法

说明书

本发明公开了一种基于血液循环肿瘤细胞的宫颈癌放疗敏感性检测方法。本发明通过宫颈癌血液循环肿瘤细胞的分选鉴定，区分不同表型血液循环肿瘤细胞群的基因差异，从中找出辐射抗性最敏感的分子及基因，通过建立宫颈癌血液循环肿瘤细胞的快速类器官模型，可用于快速评价宫颈癌辐射抗性效果并进行体外药敏实验，方便构建动态监控评价体系。

技术领域

本发明涉及检测技术技术领域，特别是一种基于血液循环肿瘤细胞的宫颈癌放疗敏感性检测方法。

背景技术

宫颈癌(Cervical Carcinoma，CC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤发病率的70-90％，严重危害女性健康。早期患者可通过手术或放疗获得治愈，局部晚期宫颈癌(Locally Advanced Cervical Cancer,LACC)以根治性放疗为主，预后较差，原因与部分患者发生辐射抵抗密切相关。不同类型的肿瘤辐射敏感性不同，而同一类型肿瘤的不同个体辐射敏感性也不尽相同。对于辐射敏感异质性的认识不足，往往造成放疗剂量的偏差，从而影响放疗疗效。

近年来研究表明，以血液循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell，CTC)为代表的液体活检可反映完整的肿瘤遗传特性并可在治疗前预测病灶的放化疗敏感性，即液体活检标志物就能有效用于实体瘤影像学可测量病灶疗效的预测。究其原因，CTC是一小群从原发肿瘤病灶逃逸进入血液循环，可以随血流进入远处器官而形成肿瘤转移灶的特殊肿瘤细胞，这群细胞往往是一群在原发肿瘤中占比不高而在血液中富集出来的具有肿瘤干细胞特征、对放化疗具有原发性抵抗特性的可致肿瘤进展及复发转移的“元凶”细胞。这些CTC细胞携带了较为全面的原发肿瘤体细胞突变及基因表达谱信息，并且可以在血液中累积新的体细胞突变。《Nature Medicine》报道CTC内的突变与肿瘤转移灶中的突变重叠程度可高达91％，明确了CTC在恶性肿瘤中的预测价值。然而，宫颈癌尚缺乏公认的较为成熟的CTC分选标志物及分选体系，CTC与宫颈癌治疗疗效关联的研究尚缺乏。基于LACC CTC混合培养的类器官模型(CTC-Derived Tumor Organoids，CDOs)，利用CDOs模型实现辐照后的α/β值检测，具有建模成功率高的优势。因而，通过建立宫颈癌特异性CTC分选体系并利用CDOs预测宫颈癌放疗敏感性具有可行性及临床价值。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种基于血液循环肿瘤细胞的宫颈癌放疗敏感性检测方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种基于血液循环肿瘤细胞的宫颈癌放疗敏感性检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：采集局部晚期宫颈癌患者的外周血样本；

步骤2：结合纳米脂质磁珠和外周血样本，捕获宫颈癌血液循环肿瘤细胞；

步骤3：对宫颈癌血液循环肿瘤细胞进行分型鉴定和基因测序；

步骤4：构建宫颈癌血液循环肿瘤细胞的快速类器官模型；

步骤5：对宫颈癌血液循环肿瘤细胞的快速类器官模型进行辐照实施；

步骤6：进行宫颈癌个体化辐射敏感性指标α/β值的检测。

更进一步的技术方案是，所述步骤3中还包括宫颈癌血液循环肿瘤细胞分型荧光鉴定和宫颈癌血液循环肿瘤细胞的簇计数。

更进一步的技术方案是，所述步骤3中的基因测序采用高通量测序。

更进一步的技术方案是，所述步骤3中的分型鉴定采用经典的免疫磁性脂质磁球，并结合宫颈癌的病理诊断标志物，制备针对宫颈癌的多位点血液循环肿瘤细胞分选鉴定系统。

更进一步的技术方案是，所述步骤4还包括对分选的宫颈癌血液循环肿瘤细胞进行3D细胞培养，通过转录组测序、分析体外肿瘤微球与肿瘤组织之间差异信号通路，筛选一系列针对差异信号通路的细胞因子和小分子抑制剂。