[发明专利]一株枯草芽孢杆菌、一种重组枯草芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明提供了一株枯草芽孢杆菌、一种重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于微生物发酵技术领域。本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)RF1‑6是以核黄素高产菌株RF1作为出发菌株，经过基因改造和诱变，筛选得到的核黄素产量最高的突变株，保藏编号为CCTCCNO：M2022565。与核黄素高产菌株RF1相比，核黄素产量能够提高22.8％。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一株枯草芽孢杆菌、一种重组枯草芽孢杆菌及其应用。

背景技术

核黄素，又称维生素B2，是一种独特的水溶性维生素，具有见光易分解的特性。它最初是在1879年从乳清中分离出来的，并被命名为牛奶色素。核黄素可以结晶成橘黄色的晶体，但其纯形态很难溶于水，可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液，在碱性溶液中容易溶解，在强酸溶液中稳定。它主要由植物和微生物合成，是一种重要的动物营养物质。它对动物来说是一种重要的营养物质，需要从外界获取。核黄素在动物体内转化为两种活性物质:黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和黄素单核核苷酸(FMN)，作为氧化还原酶氧化途径酶的辅因子，参与一系列氧化还原反应，其中一些对有氧细胞的功能至关重要。当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症。

核黄素主要用于医药、食品添加剂、饲料加工等行业，也被用于临床上癌症治疗和预防。目前国内外广泛采用微生物发酵法工业生产核黄素，能够合成核黄素的微生物有细菌、真菌和霉菌，工业生产中主要以枯草芽孢杆菌和阿舒假囊酵母作为生产菌株。目前文献中报道的枯草芽孢杆菌合成核黄素的最高产量为15.7g/L(参见【Wang，Z.，Chen，T.，Ma，X.，Shen，Z.and Zhao，X.Enhancement of riboflavin production with Bacillus subtilisby expression and site-directed mutagenesis of zwf and gnd gene fromCorynebacterium glutamicum[J].Bioresource Technology,2011,102(4):3934-3940】)，但是这一产量仍无法满足工业生产需求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一株枯草芽孢杆菌、一种重组枯草芽孢杆菌及其应用，本发明的枯草芽孢杆菌和重组枯草芽孢杆菌的核黄素产量高。

本发明提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)RF1-6，保藏编号为CCTCCNO：M 2022565。

本发明还提供了一种重组枯草芽孢杆菌，以上述方案所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)RF1-6作为原始菌株，包含重组质粒；所述重组质粒上插入有zwf基因、ywlf基因和ribBA基因；所述重组质粒的原始质粒优选为pMA5-sat；所述zwf基因、ywlf基因和ribBA基因优选的以同源重组的方式连接到所述原始质粒上。

优选的，所述zwf基因、ywlf基因和ribBA基因顺次插入在所述重组质粒的EcoRI和KpnI酶切位点之间。

优选的，所述重组质粒上还插入有强启动子P₄₃。

优选的，所述强启动子P₄₃插入在zwf基因上游的EcoRI酶切位点处。

优选的，所述重组枯草芽孢杆菌中pgi基因敲低。

优选的，所述重组枯草芽孢杆菌中purR基因敲除。

优选的，所述重组枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌RF1-6ZYRS，保藏编号为CCTCCNO：M 2022566。

本发明还提供了一种菌剂，包括上述方案所述枯草芽孢杆菌或者包括上述方案所述的重组枯草芽孢杆菌。