[发明专利]丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和大肠杆菌O157的联合定量检测方法

说明书

本发明公开了丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和大肠杆菌O157的联合定量检测方法。本发明所要保护的免疫层析芯片包含结合垫和分析膜；所述结合垫上含有被生物标记物标记的抗A抗体1、抗B抗体1、抗C抗体1和质控物；所述分析膜上含有A检测点、B检测点、C检测点和质控检测点，所述A、B和C检测点上分别固定有抗A抗体2、抗B抗体2和抗C抗体2；所述A检测点、B检测点、C检测点和所述质控检测点这四个点的中心的连线是直线，该连线与待测样品前进的方向平行，即纵向分布。该芯片能够实现对丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和大肠杆菌O157三种病原菌的同时定量检测，灵敏度高，在多重检测中具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及免疫技术诊断领域，具体涉及丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和大肠杆菌O157的联合定量检测方法。

背景技术

大肠杆菌O157(Escherichia coli O157:H7)能引起的感染性腹泻，现被世界卫生组织确定为新发现的28种传染病病原体之一。乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphiB)和丙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi C)可引起肠热症，病原菌随污染的食物进入消化道，穿透肠黏膜上皮细胞继而被巨噬细胞吞噬并在其内生长繁殖，经肠系膜淋巴结和胸导管进入血流可引起菌血症，后经血流进入各脏器器官并再次入血造成第二次菌血症，全身中毒症状严重。病人粪便为重要的传染源。大肠杆菌O157:H7是肠出血性大肠埃希氏菌的典型菌株，对人的致病力较强，感染剂量较低，每克感染载体含菌10个以上即可引起感染，人类感染后有2％～10％的死亡率。三种病原菌均为食源性致病菌，可通过食品或饮水传播。由于感染剂量低和病程发展迅速，敏感特异的多重检测方法是确保饮水和食品安全、预防细菌感染发生和传染病防控的重要手段。

食品中不允许检出病原菌，而当食品中含有的病原菌较少时比较难以检测。常规食品检验中，都规定将食品样品置于培养基中进行培养实现增菌，然后进行检测。乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌和大肠杆菌O157在培养基中的增殖速度比较快，一般8个小时增殖后即可达到10⁶～10⁸cfu/ml。

多重检测能够同时分析一个样本中的多种指标，从而判断是否存在多种感染，提高检测的准确性，并能够有效的节约样本量和时间成本从而减轻病人的痛苦。通过集成化的酶联免疫分析平台实现多重检测，成本较高且较耗时，主要应用于医院的检验科和疾病预防控制中心。现场快速检测依赖于即时检测技术(point-of-care testing,POCT)，目前POCT技术正朝着多重和智能方向发展。多重免疫POCT检测方法主要分别基于纸层析、芯片、磁珠、微流控和免疫层析等方法。其中免疫层析是目前最流行的检测技术，因此多重免疫层析方法将会是最实用的POCT方法。

目前免疫层析多重检测的主要形式包括单靶标试纸以平面或立体方式组合、分析膜上喷多条检测带等方式实现。单靶标试纸在同一平面上进行组合的为十通道UPT-POCT免疫层析试纸，其原理是将十个单靶标试纸的样品垫联合共用一个加样孔，样品加入后会分配给各个项目(发明专利：一种基于上转换发光十通道免疫层析的食源性致病菌检测试纸盘，申请号：201010257697.2)；单靶标试纸也能以多面体方式进行组合形成检测装置(发明专利：一种新型多面体多通道高通量层析装置的结构、制备及用途，专利申请号：201611238063.6)。简单将单靶标组合成多重检测方法，其缺点是因各个单靶标试纸成分不同带来阻力不同，使得样品很难被均匀分配。在分析膜上喷多个条带实现多重检测，通常会因为分析膜上的区域有限但每个条带所占体积较大，导致很难实现三个以上条带的排布；三条带的其中一条还要设置为质控带做质控，因此多条带模式的层析试纸一般只能检测2个项目(发明专利：一种霍乱弧菌的检测方法，申请号201010257686.4)。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何联合定量检测丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和大肠杆菌O157。