[发明专利]利福喷丁及其合成过程中所产生的杂质的分析方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种利福喷丁及其合成过程中所产生的杂质的分析方法。所述的方法选用苯基键合硅胶为填料的色谱柱，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱；所述的流动相A为磷酸二氢氨溶液，所述的流动相B为甲醇；所述的杂质为1‑环戊基‑4‑亚硝基哌嗪。该方法为反相高效液相色谱法，可同时实现利福喷丁和1‑环戊基‑4‑亚硝基哌嗪的分离和检测，且具有优良的分离性能和耐久性，简便可行，重现性好，高效快速，拖尾因子和理论踏板数均能达到非常好的效果，可以有效测定利福喷丁中1‑环戊基‑4‑亚硝基哌嗪的含量，专属性强。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种利福喷丁及其合成过程中所产生的杂质的分析方法。

背景技术

利福喷丁(Rifapentine)为半合成利福霉素类。对结核杆菌、麻风杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感杆菌均有抗菌作用。其中，对结核杆菌的MIC为0.02～0.2μg/ml；对淋病奈Chemicalbook瑟菌、大肠杆菌、产气杆菌、痢疾杆菌、沙雷菌也有较强的抗菌活性，对淋病奈瑟菌的MIC为0.02～2.5μg/ml；对病毒、衣原体、支原体等微生物均有活性；抗结核杆菌的作用比利福平强3～6倍。

利福喷丁为新型半合成长效利福霉素类抗生素。其抗菌机理、作用、用途与利福平相同。用于结核病、麻风病、急性肺部感染、化脓性皮肤病等的治疗。作为长效抗结核抗生素，抗结核杆菌的作用比利福平强3～6倍。适用人群广泛，安全、可靠、临床效果显著。

利福喷丁化学名3-(4-环戊基-1-哌嗪基-亚氨甲基)-利福霉素，分子式为C47H64N4O12，结构式如式Ⅱ所示，

利福喷丁的合成原料为利福霉素S(SM1)和1-氨基-4-环戊基哌嗪。1-环戊基-4-亚硝基哌嗪为原料1-氨基-4-环戊基哌嗪的亚硝化杂质，是基因毒性杂质，结构式如式Ⅰ所示：

药物合成和制剂过程中需要对利福喷丁中1-环戊基-4-亚硝基哌嗪杂质含量进行严格控制。1-环戊基-4-亚硝基哌嗪为基因毒性杂质，参考FAD规定，限度为20ppm，采用LC-MS检测。故方法灵敏度、分析成本、分析复杂程度成为了药物合成和制剂过程中质量控制的难点和重点，实现利福喷丁中1-环戊基-4-亚硝基哌嗪的高效分离并检测在利福喷丁药物的合成和制剂过程的质量控制方面具有非常重要的社会意义和经济效益。

申请号为202011515313.2的专利公开了一种利福喷丁含量的分析检测方法，采用高效液相色谱法,选用色谱柱YMC-Pack C8检测利福喷丁的含量，该方法对灵敏度要求非常低。

发明内容

本发明通过调整流动相pH值、流动相的比例、适当提高供试品浓度，选用小粒径色谱柱，将灵敏度提高至一般方法的25倍。

本发明的目的之一，在于提供一种分离利福喷丁及其合成过程中所产生的杂质的方法，该方法为分离利福喷丁及其合成过程中所产生的杂质提供了一种新思路。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

所述的方法选用苯基键合硅胶为填料的Ultimate XB-Phenyl色谱柱，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱；所述的流动相A为磷酸二氢氨溶液，所述的流动相B为甲醇；所述的杂质为1-环戊基-4-亚硝基哌嗪；所述杂质的结构式如式Ⅰ所示，所述利福喷丁的结构式如式Ⅱ所示，

进一步，所述磷酸二氢氨溶液的浓度为0.01mol/L～0.03mol/L，pH值为2.5～4.5。

进一步，作为一种优选，所述磷酸二氢氨溶液的浓度0.02mol/L，pH值为3.6。

进一步，所述梯度洗脱按下表进行，