[发明专利]用于鉴别新冠核衣壳蛋白的核酸适体-抗体混合夹心法

说明书

本发明公开了用于鉴别新冠核衣壳蛋白的核酸适体‑抗体混合夹心法，属于生物检测技术领域。本发明所使用的核酸适体‑抗体混合夹心法以SARS‑CoV‑2的核衣壳蛋白为检测靶点，能够准确鉴别出SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白。使用本发明进行鉴别SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白的步骤包括：收集待测样品；将待测样品与核酸适体‑抗体组合混合形成混合物；检测混合物中是否存在SARS‑CoV‑2‑核衣壳蛋白‑核酸适体复合物。利用核酸适体‑抗体混合夹心法能够鉴别SARS‑CoV‑2家族中多种病毒的核衣壳蛋白，可解决基于核酸适体的SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白靶向识别策略的难题。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及用于鉴别新冠核衣壳蛋白的核酸适体-抗体混合夹心法。

背景技术

新冠肺炎的“早发现”措施，主要依赖于疾病的诊断，目前主要有三种方式，一是核酸诊断方法（如荧光定量PCR）、二是抗原诊断（如胶体金）、三是抗体检测（如ELISA），但这些检测方法目前并不完善，对加护、设备要求高，需依赖特定仪器、特殊实验室和专业技术人员，且检测过程复杂，不能满足及时检测需求，还存在一定的漏检率。

核酸适体是指通过指数富集的配基系统进化技术（SELEX）筛选分离得到的DNA或者RNA分子，它可以与其它靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合。核酸适体具有高亲和力，高特异性，稳定性好等多个优点，近年来其在生物医学领域得到了广泛的应用。由于病毒和病原体容易变异，从而能轻易逃离免疫系统的应答，对人体造成难以预测的重大危害。核酸适体的各方面优点使其在病毒和病原体的检测与控制方面有着很好的应用前景。

传统意义上的双抗夹心法是利用被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用有颜色的纳米颗粒标记后直接通过肉眼观测得到。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。采用核酸适体-抗体混合夹心策略是指用核酸适体替代检测抗体或者捕捉抗体，有利于提高检测的灵敏度和检出率。

中国专利CN104031921A公开了一种西维因的核酸适体、衍生物及其应用，该发明利用核酸适体制备胶体金试纸，检测西维因；中国专利CN104745586A公开了可卡因核酸适体、检测试剂盒及其应用，该发明使用核酸适体制备胶体金试纸检测可卡因。可见，核酸适体在检测领域发挥重要作用，但目前针对核酸适体检测SARS-CoV-2鲜有研究。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于鉴别新冠（SARS-CoV-2）核衣壳蛋白的核酸适体-抗体混合夹心法，使用这种方法能够快速并且准确鉴别样品中的SARS-CoV-2。

为达到上述发明目的，采用如下技术方案。

一种复合物，包括：

核酸适体与SARS-CoV-2野生型和/或突变型核衣壳蛋白特异性结合形成的复合物；

核酸适体与可检测标记物组成的偶联物与SARS-CoV-2野生型和/或突变型核衣壳蛋白特异性结合形成的复合物。

核衣壳蛋白是冠状病毒中含量最丰富的蛋白。核衣壳蛋白是一种具有高度免疫原性的磷蛋白，基因序列非常保守，因此非常适合作为检测标志物。本发明使用核酸适体对SARS-CoV-2-进行检测和鉴定，核酸适体具有分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短等特点，能够特异性结合SARS-CoV- 2核衣壳蛋白不同位点。

优选地，可检测标记物包括以下至少一种：

生物素；化学发光基团；化学荧光基团；荧光蛋白；酶；抗体；抗原；配体；放射性同位素；胶体金；乳胶微球。

优选地，

核酸适体包括以下至少一条：

如SEQIDNO.1所示序列N35：