[发明专利]一种基于光栅扫描识别的单分子多联检测方法

说明书

一种基于光栅扫描识别的单分子多联检测方法，将大量捕获珠相互散开布设在固珠板（或检测芯片），其中至少部分捕获珠分别与两种以上分析物特异性结合，且不同的分析物特异性结合有不同的标记物，在固珠板附近设置两组以上分别与不同标记物配合的光栅检测装置，每组光栅检测装置的光栅口先后依次从固珠板一端处的捕获珠开始逐列扫描所有捕获珠、并对结合有不同标记物的捕获珠的数量分别进行统计。本发明采用多组光栅检测装置先后依次对各捕获珠进行扫描并对不同的分析物分别实时计数，在扫描检测的同时完成不同分析物数量的统计，大大提高了检测速度。

技术领域

本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种基于光栅扫描识别的单分子多联检测方法，属于分子检测技术领域。

背景技术

单分子检测（Single Molecule Detection, SMD）是近年快速发展起来的一种超灵敏的检测技术，其是指从单分子水平上对目标物进行测定与分析，是一种全新的检测方法，也开辟了一种全新的检测领域。此种检测方式能够检测浓度极低的分析物，且检测所需的试剂及占用的空间均很小，因此在一次操作步骤中的同一个容器空间内对多种分析物进行检测有利于提高检测效率。如美国Quanterix公开的“CN201180021686.7-扩大用于检测分子或颗粒的测定法中的动态范围的方法和系统”和“CN201180019462.2-使用微珠或其他捕获物对分子或颗粒的超灵敏检测”都提到了对多种分析物进行检测分析。然而，其检测方式都是先对一种分析物的荧光成像后再对另一种分析物的荧光成像，最后在图片中数发光分析物的数量，对成像设备有较高的要求，且检测速度慢。

发明内容

本发明针对当前的单分子检测中对多种分析物进行检测分析时对设备要求高且检测速度慢的问题，提出了一种基于光栅扫描识别的单分子多联检测方法，能够依次对多种分析物同步进行实时检测，设备简单，且检测速度快。

本发明为解决上述问题所采用的技术手段为：一种基于光栅扫描识别的单分子多联检测方法，将大量捕获珠相互散开布设在固珠板（或检测芯片），其中至少部分捕获珠分别与两种以上分析物特异性结合，且不同的分析物特异性结合有不同的标记物，在固珠板附近设置两组以上分别与不同标记物配合的光栅检测装置，每组光栅检测装置的光栅口先后依次从固珠板一端处的捕获珠开始逐列扫描所有捕获珠、并对结合有不同标记物的捕获珠的数量分别进行统计。

进一步地，每组光栅检测装置包括光栅头、光感应器和信号处理器，其中光栅头包括成列设置的多个独立的光栅口，光感应器包括多个独立的感应元件，且扫描时，一个光栅口对准一个捕获珠或者不对准捕获珠，一个感应元件与一个光栅口对应并能感应其对应的光栅口处入射的光，感应元件感应到入射光后反馈至信号处理器，信号处理器根据反馈结果统计分析物的数量。

进一步地，捕获珠包括微粒、微珠、磁性微粒或磁性微珠。

进一步地，固珠板包括平面板或者具有微孔阵列的板。

进一步地，分析物包括蛋白质或核酸。

进一步地，感应元件包括光敏管，其感应入射光后输出电流至信号处理器，信号处理器根据输出电流的光敏管的数量统计分析物数量。

进一步地，两组以上的光栅检测装置之间成排并列设置，依次先后从固珠板同一端处的捕获珠开始进行扫描，通过固珠板与光栅检测装置之间的相对移动完成全部捕获珠的扫描检测。

进一步地，两组以上的光栅检测装置通过旋转中心固定成一体结构，扫描时：

第一步：一组光栅检测装置从固珠板一端处的捕获珠（初始端）开始进行扫描，通过固珠板与光栅检测装置之间的相对移动，使此组光栅检测装置扫描至固珠板另一端的捕获珠处（末端），完成一种标记物的扫描检测；

第二步：转动旋转中心，使另一组光栅检测装置旋转至固珠板末端的捕获珠处，通过固珠板与光栅检测装置之间与第一步中的移动方向相反的相对移动，使此组光栅检测装置扫描至第一步扫描时的初始端，完成另一种标记物的扫描检测；