[发明专利]靶向和拮抗HMGB1分子的核酸适体

说明书

本发明公开了用于靶向和拮抗HMGB1分子的核酸适体，属于生物技术领域。本发明核酸适体能高效结合HMGB1，且核酸适体具有良好的亲和力、低免疫原性、分子量小、合成成本低、易于保存、方便进行修饰和取代等优点，在HMGB1的核酸类拮抗剂以及检测等领域有重要的应用价值。此外，本发明核酸适体可用于制备治疗急性肺炎等炎症的药物，在实验中发现本发明核酸适体能有效减少急性炎症小鼠血液中IL‑6和TNF‑α显著性地下调，表明核酸适体ZH‑1a在炎症疾病中可抑制炎症相关因子的释放。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及用于靶向和拮抗HMGB1分子的核酸适体以及HMGB1核酸适体拮抗剂的开发和应用。

背景技术

高迁移率族蛋白B1（high mobility group box-I protein，HMGB1）是一种普遍存在的高度保守的染色质结合蛋白，广泛存在于所有哺乳动物的有核细胞和血小板中。HMGB1蛋白是一种多功能蛋白分子，在细胞的不同位置具有多种不同的生物学功能可调控多种信号通路。HMGB1的调控和检测在多种疾病中显示出重要的作用，但是HMGB1拮抗剂的开发却十分缓慢，主要开发了HMGB1的蛋白抗体。

近年来，被称为化学抗体的核酸适体（aptamer）在疾病诊断及治疗领域已显示出广阔的应用前景。核酸适体的出现，突破了传统意义上关于核酸只是遗传信息存储和转运载体的认识，表明利用其结构的多样性可实现类似抗体的分子配体或分子探针的功能。核酸适体是通过模拟自然进化过程的人工筛选技术—指数富集配体系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX）筛选得到能与靶分子特异结合的DNA或RNA单链。核酸适体作为一种识别分子，可作用于蛋白质、金属离子、小分子化合物、细胞等靶标，主要借助于氢键、范德华力、疏水作用等分子间作用力形成特殊的三维结构，从而特异地识别靶标物质并影响其生物活性。核酸适体具有免疫原性低、生物毒性小、易于合成和标记等特点，其在基础、临床、药物开发中的研究不断增多，越来越多的针对生命系统中重要分子的适体被筛选出来。

过度免疫是HMGB1分子在体内促进炎症发展的主要原因，因此发展低免疫原性的HMGB1拮抗剂尤为重要。核酸适体具有与抗体相似的与靶标特异性结合的能力，但相较于抗体，显现出极低的免疫原性。此外，HMGB1作为一种可分泌蛋白，具有较小的空间结构，使适体介导的阻断成为可能。因此利用核酸适体靶向抑制胞外HMGB1的活动，是一种非常有潜力的抑制炎症发生的策略，也是一类新的HMGB1核酸类拮抗剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有较好的亲和力、低免疫原性、分子量小、能够体外化学合成、序列稳定、便于保存、方便标记、易于修饰的核酸适体，能够特异性识别HMGB1，作为HMGB1的拮抗剂。

为达到上述发明目的，采用如下技术方案：

一种用于检测和拮抗HMGB1分子的核酸适体，序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示：

SEQIDNO.1：

AAGGAGCAGCGTGGAGGATAAAAACAAGGTCGGGGGGCATGATTATGTTTAGGGTGTGTCGTCGTGGT；

SEQIDNO.2：

GGAGCAGCGTGGAGGATAAAAACAAGGTCGGGGGGCATGATTATGTTTAGGGTGTGTCGTCG。