[发明专利]具有强特异性的半胱氨酸荧光分子探针及其合成方法与应用、以及含有其的试剂盒

说明书

一种具有强特异性的半胱氨酸荧光分子探针及其合成与应用、以及含有其的试剂盒，所述分子探针具有式Ⅰ所示的结构式：所示荧光分子探针合成路线简单，成本低廉，操作简便，对半胱氨酸的检测具有优异的特异性，且具有快速的响应速度，在对半胱氨酸的快速检测方面具有较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种且具有强特异性的半胱氨酸荧光分子探针及其合成与应用、以及含有其的试剂盒，属于有机小分子荧光探针技术领域。

背景技术

半胱氨酸(cysteine，Cys)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)等生物硫醇在生物系统中发挥着重要作用，其水平与癌症、代谢疾病、精神退行性疾病等疾病密切相关。其中，半胱氨酸被认为是蛋白质形成、抗氧化剂生成、金属离子结合的必需氨基酸。因此，其检测具有重要的声明科学和医学价值。目前，已经开发了几种用于检测生物条件下半胱氨酸的分析方法，其中，基于荧光的分子传感系统因其操作简单和生物相容性高而备受关注。基于其巯基的亲核性和还原性，已有了多种半胱氨酸反应型荧光探针被报道，然而，它们大多容易受到其他生物硫醇的干扰。因此，开发强特异性、高灵敏度的半胱氨酸荧光分子探针具有重要的意义。

发明内容

本发明针对当前存在的问题，提出了一种具有强特异性的半胱氨酸荧光分子探针及其合成与应用、以及含有其的试剂盒，能够快速准确地检测出半胱氨酸。

本发明为解决上述问题所采用的技术手段为：一种具有强特异性的半胱氨酸荧光分子探针，所述分子探针具有式Ⅰ所示的结构式：

一种具有强特异性的半胱氨酸荧光分子探针的合成，包括以下步骤：

(1)将化合物TPC溶解于二氯甲烷，加入乙二酰氯和DMF，反应结束后浓缩干燥；然后再溶解于二氯甲烷，加入苯酚、4-二甲氨基吡啶和三乙胺至反应结束，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，萃取后干燥浓缩，最后层析纯化，得式Ⅱ所示中间物：

其中乙二酰氯和DMF的加入方式为0-5℃搅拌加入，在室温下继续搅拌至反应结束后减压浓缩、然后真空干燥，且1mmol TPC优选加入5-10mL二氯甲烷、两滴即0.1mL DMF，加入的乙二酰氯与TPC量的比优选为1.2:1；反应结束且干燥后再次溶解时1mmol TPC对应的产物中加入的二氯甲烷优选为2-3mL，苯酚优选为1-1.2mmol，4-二甲氨基吡啶优选为0.1-0.5mmol，三乙胺优选为3-4mmol，萃取时先用DCM或乙酸乙酯萃取，再用饱和氯化钠溶液萃取有机层；层析纯化采用硅胶柱层析纯化；

(2)式Ⅱ中间物与Lawesson试剂、对二甲苯反应至结束，浓缩后层析纯化得到式Ⅰ所示目标分子探针：

其中反应时在140℃惰性气体保护下搅拌反应至结束，惰性气体优选为氩气；浓缩方式采用减压浓缩，层析纯化采用柱层析纯化；1mmol式Ⅱ化合物中优选加入1.4-1.5mmolLawesson试剂，1.5-2mL对二甲苯。

一种具有强特异性的半胱氨酸荧光分子探针在半胱氨酸检测试剂盒中的应用。

一种半胱氨酸检测试剂盒，所述试剂盒包括结构式为式Ⅰ的半胱氨酸荧光分子探针，以及半胱氨酸检测组合物。

进一步地，半胱氨酸检测组合物包括半胱氨酸标准品和溶剂。

进一步地，溶剂为PBS缓冲液和乙腈的混合溶液。

进一步地，溶剂中PBS缓冲溶液(0.01mol/L，pH＝7.4)和乙腈的体积比为7：3。

本发明所述的半胱氨酸检测试剂盒的检测原理为：