[发明专利]一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体及诱导表达方法

说明书

本发明公开了一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体及诱导表达方法，1)将SEQ ID NO:1所示的CagA目的基因连接在表达载体pET28a(+)中，构成重组载体pET28a‑CagA；2)将重组载体pET28a‑CagA转化至外源蛋白表达的宿主细胞E.coli Top 10中进行诱导表达，得到表达CagA的重组大肠杆菌pET28a(+)/CagA/E.coli Top 10。本发明的重组载体，采用pET28a(+)质粒获得的重组载体表达效果最好，同时pET28a(+)载体序列中除了组氨酸标签序列没有其它的标签或融合蛋白基因序列，获得的CagA蛋白最接近原始蛋白氨基酸序列和蛋白结构，使得外源蛋白的可溶性表达水平高，具备很高的生物学活性，获得了单独高效表达的可溶性重组蛋白CagA，实现目的蛋白的可溶性表达，工艺简单，重复性好，对CagA蛋白后续进行更有效深入的研究提供了基础。

技术领域

本发明涉及生物及生物制药技术领域，具体而言，涉及一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体及诱导表达方法。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)，作为一种螺旋形、微嗜氧、革兰氏阴性感染性病原体，主要寄生在人体的胃黏膜上。Hp的感染会引起多种胃肠道疾病的发生，如胃炎、消化性溃疡、胃癌。据报道，世界上将近一半的人遭受Hp的感染，免疫接种可预防甚至治疗Hp的感染，Hp疫苗的研究迫在眉睫。

由于Hp抗原相关蛋白在不同地区的同一细菌分离物中的表达率不同，机体对不同抗原蛋白的免疫反应水平也不同，最终都会影响疫苗抗原的选择。因此抗原的编码基因应广泛定位于临床毒株的基因组中。基因序列要保守，自然表达率也要高，表达产物的免疫原性要强。细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)是Hp的最主要毒力因子之一，其主要功能是上调促炎细胞因子，激发炎症反应。研究显示，由于Hp的CagA蛋白具有和人类血小板抗原相类似的共同抗原或类似抗原，抗Hp抗体直接与血小板和巨核细胞表面的糖蛋白发生抗原抗体反应的交叉免疫，导致CagA蛋白与根除Hp感染后血小板数量变化的差异有关。CagA阳性Hp菌株感染比CagA阴性Hp菌株感染更能增加胃癌发生的几率，CagA可通过调控细胞生长和运动相关的信号通路，使胃上皮细胞发生转化而发生癌变，并在胃癌的发生中发挥着双重作用。在消化性溃疡的研究中，无论是胃溃疡或者十二指肠球部溃疡患者，其血清Hp CagA抗体的阳性率均明显高于正常人群。

CagA作为Hp疫苗中最有潜力的候选抗原，而不同的重组载体的选择以及诱导表达方法对其表达量都有着较大的影响。

有鉴于此，特提出本申请。

发明内容

为了解决上述问题，本发明目的在于提供一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体及诱导表达方法，外源蛋白的可溶性表达水平高，具备很高的生物学活性，获得了单独高效表达的可溶性重组蛋白CagA，从而实现了目的蛋白的可溶性表达，工艺简单，且重复性好，为后续对CagA蛋白进行更有效和深入的研究提供了基础。

本发明通过下述技术方案实现：

一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体，所述重组载体由CagA基因导入表达载体中构建而成，所述CagA基因核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

其中，SEQ ID NO:1核苷酸序列如下所示：