[发明专利]一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体及诱导表达方法

权利要求书

1.一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体，其特征在于，所述重组载体由CagA基因导入表达载体中构建而成，所述CagA基因核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体，其特征在于，所述表达载体采用原核载体。

3.根据权利要求1所述一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体，其特征在于，所述表达载体采用pET28a(+)。

4.一种CagA的重组载体的宿主细胞，其特征在于，用于表达权利要求1-3任一所述可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA。

5.根据权利要求4所述一种CagA的重组载体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为E.coli Top 10。

6.一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的诱导表达方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将SEQ ID NO:1所示的CagA目的基因连接在表达载体pET28a(+)中，构成重组载体pET28a-CagA；

2)将重组载体pET28a-CagA转化至外源蛋白表达的宿主细胞E.coli Top 10中进行诱导表达，得到表达CagA的重组大肠杆菌pET28a(+)/CagA/E.coli Top 10。

7.根据权利要求6所述一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的诱导表达方法，其特征在于，步骤1)的具体操作为：根据CagA的氨基酸序列，获得CagA目的基因片段，对CagA目的基因进行全基因合成，然后通过BamHI和XhoI的酶切位点连接到表达载体pET28a(+)，得到重组质粒。

8.根据权利要求6所述一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的诱导表达方法，其特征在于，步骤1)中的重组载体带有His标签。

9.根据权利要求6所述一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的诱导表达方法，其特征在于，步骤2)中诱导表达的具体操作为：取过夜培养的pET28a(+)/CagA/E.coli Top 10菌落于卡那霉素抗性的LB培养基中，在220rpm、37℃下培养12-16h；取过夜培养的菌液加入卡那霉素抗性的LB培养基中，在220rpm 37℃下培养2～3h，二次活化至OD₆₀₀为0.6～0.8时，加入IPTG，使IPTG终浓度为0.5mM，在220rpm、16℃下诱导表达16h。

10.根据权利要求9所述的一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的诱导表达方法，其特征在于，将诱导表达后的菌液离心，收集沉淀，用pH为7.0-7.5的10mM PBS缓冲液重悬混匀，冰水浴高压匀浆破菌，离心，收集上清，进行重组蛋白的可溶性分析。