[发明专利]维持干细胞干性的多功能DNA水凝胶整合敷料及其制备方法

权利要求书

1.一种多功能DNA水凝胶的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）采用三种DNA链段来制备DNA链段共聚物，三种DNA链的添加量能够调节；

（2）将步骤（1）中制备获得的DNA链段共聚物和_L-抗坏血酸2-磷酸进行化学交联形成致密氢键，得到多功能DNA水凝胶；通过控制步骤（1）中三种DNA链的添加量来调节多功能DNA水凝胶的孔隙孔径；

步骤（1）具体为：

在真空环境下，将3-9 mM丙烯酸酐改性的第一DNA链、3-9 mM丙烯酸酐改性的第二DNA链、3-9 mM丙烯酸酐改性的第三DNA链段和丙烯酰胺溶解在150μL HEPES缓冲溶液中并均匀混合，混合物中丙烯酰胺的体积浓度为2-10%，得到DNA链段混合物；第一DNA链的碱基序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；第二DNA链的碱基序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；第三DNA链的碱基序列如序列表中SEQ ID NO:3所示；

将10-40 mg过硫酸铵、5-20μL N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液添加到所述DNA链段混合物中，在室温下反应5-15 min，转移到4-10 ℃下继续聚合12-16 h，使用微孔旋滤装置离心纯化，放置在氮气气流下吹干，得到DNA链段共聚物，保存在2-10℃备用。

2.根据权利要求1所述一种多功能DNA水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤（2）具体为：在氮气保护下，将3-9 mM步骤（1）中制备获得的DNA链段共聚物和200-260 µM _L-抗坏血酸2-磷酸添加到10μL HEPES缓冲溶液中，形成多功能DNA水凝胶。

3.根据权利要求1所述一种多功能DNA水凝胶的制备方法，其特征在于，通过控制步骤（1）中三种DNA链的添加量，来调节多功能DNA水凝胶的孔隙孔径，制备获得的多功能DNA水凝胶的孔隙孔径大小为40-240 μm。

4.一种维持干细胞干性的多功能DNA水凝胶整合敷料的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）采用三种DNA链段来制备DNA链段共聚物，三种DNA链的添加量能够调节；

（2）将步骤（1）中制备获得的DNA链段共聚物和_L-抗坏血酸2-磷酸混合时，通过原位掺杂加入一定量的脂肪间充质干细胞，得到负载脂肪间充质干细胞、能够维持干性的多功能DNA水凝胶整合敷料；

步骤（1）具体为：

在真空环境下，将3-9 mM丙烯酸酐改性的第一DNA链、3-9 mM丙烯酸酐改性的第二DNA链、3-9 mM丙烯酸酐改性的第三DNA链段和丙烯酰胺溶解在150μL HEPES缓冲溶液中并均匀混合，混合物中丙烯酰胺的体积浓度为2-10%，得到DNA链段混合物；第一DNA链的碱基序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；第二DNA链的碱基序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；第三DNA链的碱基序列如序列表中SEQ ID NO:3所示；

将10-40 mg过硫酸铵、5-20μL N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液添加到所述DNA链段混合物中，在室温下反应5-15 min，转移到4-10 ℃下继续聚合12-16 h，使用微孔旋滤装置离心纯化，放置在氮气气流下吹干，得到DNA链段共聚物，保存在2-10℃备用；

通过控制步骤（1）中三种DNA链的添加量，使所述多功能DNA水凝胶整合敷料中DNA水凝胶的孔隙孔径大小为40-80 μm。

5.根据权利要求4所述一种维持干细胞干性的多功能DNA水凝胶整合敷料的制备方法，其特征在于，步骤（2）具体为：在氮气保护下，将3-9 mM DNA链段共聚物与200-260 µM的_L-抗坏血酸2-磷酸添加到HEPES缓冲溶液中，同时加入一定量的脂肪间充质干细胞，形成能够维持干细胞干性的多功能DNA水凝胶整合敷料。