[发明专利]一种复合益生菌制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种复合益生菌制剂，其特征在于，所述复合益生菌制剂为液体制剂，包括枯草芽孢杆菌、副干酪乳酸菌、沼泽红假单胞菌和小球藻；先分别制备枯草芽孢杆菌、副干酪乳酸菌、沼泽红假单胞菌和小球藻菌株制剂，有效活菌数不低于1.0×10⁹ CFU/mL，再按比例将各菌株制剂复配成复合益生菌，制备得复合益生菌制剂；其中，每单位体积复合益生菌制剂中，枯草芽孢杆菌、副干酪乳酸菌、沼泽红假单胞菌和小球藻之间的体积比为4：3：1：2。

2.根据权利要求1所述的复合益生菌制剂，其特征在于，每单位复合益生菌制剂中有效活菌量不低于1.0×10⁹ CFU/mL。

3.根据权利要求1或2所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌、副干酪乳酸菌的扩大培养基为：红糖200g/L，尿素5g/L，酸二氢钾0.5g/L，七水合硫酸镁0.5 g/L，胰蛋白胨0.5g/L，酵母提取物3 g/L；发酵条件：温度26-38℃，搅拌速率100—150 r/min，通气比：1：0.4，培养时间24—72h，培养密度为1.0×10 ⁹ ～10¹³ CFU/mL。

4.根据权利要求1或2所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述小球藻BG11的培养基为：NaNO₃ 1.5 g/L，K₂HPO₄ 0.04 g/L，MgSO₄.7H₂O 0.075 g/L，CaCl₂.7H₂O 0.036 g/L，Na₂CO₃ 0.02 g/L，柠檬酸 0.006 g/L，柠檬酸铁 0.006 g/L ，微量元素溶液 A5 1ml/ L，溶解于蒸馏水中，并在120-122℃下高压灭菌18-22 min，培养基放置28 ℃恒温光照培养箱进行培养72 h；其中A5的成分是H₃BO₄ 2.86 g/L，MnCl₂.4H₂O 1.81 g/L，ZnSO₄ 0.222 g/L，Na₂MoO₄ 0.39 g/L，CuSO₄.5H₂O 0.079 g/L，Co(NO₃)₂.6H₂O 49.4 g/L。

5.根据权利要求1或2所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述沼泽红假单胞菌的培养基为∶氯化铵 1 g/L ,碳酸氢钠 1 g/L ,磷酸氢二钾0.2 g/L ,乙酸钠1～5 g/L ,七水硫酸镁0.2 g/L ,氯化钠0.5～2 g/L ,生长因子10 ml/L,微量元素溶液10 ml/L ,蒸馏水加至1000 ml，pH 7.0，放置28 ℃恒温光照培养箱进行培养72 h。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括：

S1.分别制备草芽孢杆菌、副干酪乳酸菌、沼泽红假单胞菌和小球藻的液体制剂：分别将各菌株进行发酵培养，所得发酵液即为液体制剂；

S2.益生菌微生态制剂的制备：将步骤S1制得的各菌株的液体制剂混合均匀，即得复合益生菌制剂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括：

将枯草芽孢杆菌经36℃ ~ 37℃活化培养12 ~24 h后，经30℃ ~ 37℃扩大培养48 ~72h，获得所述枯草芽孢杆菌的液体制剂；

将副干酪乳酸菌经35℃ ~ 37℃活化培养12 ~ 24h后，经30℃~ 37℃扩大培养48 ~72h，获得所述副干酪乳酸菌菌株的液体制剂；

将沼泽红假单胞菌在恒温光照培养箱中28℃，培养72h， 获得所述沼泽红假单胞菌的液体制剂；

将小球藻在恒温光照培养箱中28℃，培养72h获得所述小球藻的液体制剂。