[发明专利]一种制备高产EPA裂殖壶菌的方法及其应用

权利要求书

1.一种制备高产EPA裂殖壶菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：选取对数时期的裂殖壶菌，用无菌蒸馏水制成菌悬液；

S2：将菌悬液置于ARTP诱变仪内进行辐照处理；

S3：取辐照后的菌悬液稀释后均匀涂布在固体平板上，于培养箱中避光保存；

S4：挑选单菌落摇瓶发酵培养，筛选辐照后致死率高的菌液作为出发菌株；

S5：通过平板筛选，摇瓶发酵培养，检测EPA产量；

S6：根据EPA产量筛选高产EPA的裂殖壶菌菌株。

2.根据权利要求1所述的制备高产EPA裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述菌悬液是在裂殖壶菌对数时期使用无菌蒸馏水配制而成，所述菌悬液的细胞浓度OD660值为0.6～0.8。

3.根据权利要求1所述的制备高产EPA裂殖壶菌的方法，其特征在于，使用ARTP诱变仪对菌悬液进行辐照处理包括以下步骤：

S21：取菌悬液涂布在无菌载片上，将无菌载片转移至ARTP诱变仪凹槽内，凹槽下放置EP管；

S22：开启ARTP诱变仪，设定辐射时间为20s，功率为110w，气量为10SLM；

S23：诱变完毕将载片转移至装有1mL浓度为1mol/L山梨醇的EP管内，振荡洗脱形成新的菌悬液。

4.根据权利要求1所述的制备高产EPA裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述避光保存温度为26～30℃，培养时间为3d。

5.根据权利要求1所述的制备高产EPA裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述固体平板使用的培养基为2-DG固体培养基，所述2-DG固体培养基的组分以质量份计，每1000份固体培养基包括，硫酸钠12份，七水硫酸镁2份，硫酸铵4份，氯化钾0.5份，硫酸钾0.65份，氯化钙0.17份，味精10份，葡萄糖50份，磷酸二氢钾1份，酵母粉10份，2-DG 0.6份，琼脂粉20份，余量为无菌水。

6.根据权利要求1所述的制备高产EPA裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述发酵培养选择的发酵培养基的组分以质量份计，每1000份发酵培养基包括，硫酸钠12份，七水硫酸镁2份，硫酸铵4份，氯化钾0.5份，硫酸钾0.65份，氯化钙0.17份，味精10份，苹果酸0.6份，葡萄糖50份，磷酸二氢钾1份，酵母粉10份，玉米浆干粉5份，余量为无菌水。

7.根据权利要求1至6任一项所述制备高产EPA裂殖壶菌的方法在生产高产EPA裂殖壶菌中的应用。