[发明专利]一种猴痘病毒抗原检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种猴痘病毒抗原检测试剂盒及其制备方法，属于体外诊断技术领域，猴痘病毒抗原检测试剂盒包括检测卡和样本提取液，检测卡包括上盖、下盖和猴痘病毒抗原检测试纸条，猴痘病毒抗原检测试纸条包括样品垫、硅芯金壳结合垫、固相抗体反应膜、吸水纸和PVC板，上盖上设有加样孔和观察窗，一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，包括硅芯金壳结合垫的制备方法、样品垫的制备方法、固相抗体反应膜的制备方法，本发明检测样本种类多，包括口咽拭子、体液、血液以及皮肤病灶组织（包括水疱液、脓疱液、痂皮），且灵敏度高，可有效缩短病毒诊断的窗口期，以降低潜伏期带来的隐形传播风险，有效控制疫情的大规模传播。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体的说，涉及一种猴痘病毒抗原检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

猴痘（Monkeypox）是一种由猴痘病毒（MPXV）引起的人畜共患病，最早发现于非洲西部和中部地区原始森林。猴痘病毒与痘苗病毒、天花病毒相似，临床表现为暴露10-12天后发热，发热2-3天后皮肤出疹。皮疹的变化，从斑丘疹，一直到小水疱、脓疱，大约10天左右出现结痂。病毒可以通过直接密切接触由动物传染给人，传染途径主要包括血液、体液、皮肤或黏膜伤口。人类二次传播主要通过空气飞沫传播，飞沫可感染眼睛、鼻子和喉咙的黏膜。

2022年5月21日，世界卫生组织发布猴痘疫情暴发预警，并将这次在中非和西非以外国家引发的猴痘疫情定义为“极度不寻常事件”。截至26日，世界卫生组织表示，猴痘已蔓延至全球20多个国家，欧盟已确诊118例，其中西班牙和葡萄牙分别为51例和37例。英国卫生安全局表示英国已经确诊90例，美国、加拿大也纷纷确诊9例和16例。在这些病例中，世界卫生组织表示死亡率在3%到6%之间。

目前，生物学的聚合酶链反应PCR是国内外检测猴痘病毒的主要检测方法，但需要依赖设备，且较易产生污染。我国目前尚未建立除PCR检测法外的其他诊断方法。因此，建立快速准确的猴痘病毒诊断方法，才能制定相关措施政策，控制其可能造成的伤害，为我国应对可能出现的猴痘疫情以及生物反恐提供应急技术储备。

世界卫生组织2022年5月23日发布的《猴痘病毒实验室检测》中期指导文件中指出，临床推荐诊断样本为皮肤病灶组织，包括渗出液、病灶痂皮。猴痘病毒的潜伏期较长，通常为6至13天，可能长达21天。所以研制一种猴痘病毒检测试剂盒，检测皮疹出现前其他易取感染组织，缩短病毒诊断的窗口期，可有效降低潜伏期带来的隐形传播风险，控制疫情的大规模传播。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猴痘病毒抗原检测试剂盒及其制备方法，猴痘病毒抗原检测试剂盒检测样本种类多，包括口咽拭子、体液、血液以及皮肤病灶组织（包括水疱液、脓疱液、痂皮），且灵敏度高，可有效缩短病毒诊断的窗口期，以降低潜伏期带来的隐形传播风险，有效控制疫情的大规模传播。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，包括硅芯金壳结合垫的制备方法、样品垫的制备方法、固相抗体反应膜的制备方法；所述硅芯金壳结合垫的制备方法如下：

（1）对1mL硅芯金壳进行涡旋和超声处理；

（2）将EDC按100μg/mL比例加入至硅芯金壳中；

（3）将Sulfo-NHS按200μg/mL比例加入至硅芯金壳中，确保活化时pH值为5；

（4）在室温条件下涡旋孵育30min；

（5）在4℃、4000rpm条件下离心5min，移除上清液，除去所有过量的EDC或Sulfo-NHS，用同体积反应缓冲液重悬，重复两次；

（6）按20μg/mL比例添加标记的猴痘病毒单克隆抗体2，4℃条件下涡旋孵育1.5h；

（7）在4℃、7000 rpm条件下离心10min，除去上清液，用偶联物稀释液将沉淀物定容至原体积，然后进行涡旋和超声处理，使偶联物完全重悬，得到硅芯金壳标记抗体原液，测OD800值；