[发明专利]一种猴痘病毒抗原检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括硅芯金壳结合垫的制备方法、样品垫的制备方法、固相抗体反应膜的制备方法；所述硅芯金壳结合垫的制备方法如下：

对1mL硅芯金壳进行涡旋和超声处理；

将EDC按100μg/mL比例加入至硅芯金壳中；

将Sulfo-NHS按200μg/mL比例加入至硅芯金壳中，确保活化时pH值为5；

在室温条件下涡旋孵育30min；

在4℃、4000rpm条件下离心5min，移除上清液，除去所有过量的EDC或Sulfo-NHS，用同体积反应缓冲液重悬，重复两次；

按20μg/mL比例添加标记的猴痘病毒单克隆抗体2，4℃条件下涡旋孵育1.5h；

在4℃、7000 rpm条件下离心10min，除去上清液，用偶联物稀释液将沉淀物定容至原体积，然后进行涡旋和超声处理，使偶联物完全重悬，得到硅芯金壳标记抗体原液，测OD800值；

将硅芯金壳标记抗体原液按OD800值6稀释，用喷金仪按2.5μL/cm溅射于聚酯膜上，37℃过夜干燥，制得硅芯金壳结合垫。

2.根据权利要求1所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述反应缓冲液包括pH值为7.5的50mM的PBS缓冲液、质量分数为0.5%的BSA、质量百分比为0.5%的酪蛋白钠、体积分数为0.5%的吐温20。

3.根据权利要求1所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述偶联物稀释液包括pH值为8.5的100mM的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.5%的酪蛋白、质量百分比为2%的蔗糖、质量分数为0.5%的海藻糖、质量分数为0.3%的PVP40。

4.根据权利要求1所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述样品垫的制备方法如下：将样品垫处理液浸湿8964玻璃纤维素膜，5mL/条，37℃过夜干燥，制得样品垫。

5.根据权利要求4所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述样品垫处理液包括pH值为8.5的Tris-HCL缓冲液、100mM柠檬酸三钠、质量百分比为0.5%的PVP40、质量百分比为0.05%的吐温20、质量百分比为0.3%的EDTA-4Na、1.0mg/mL主动型异嗜性抗体阻断剂、0.2mg/mL抗RBC单克隆抗体。

6.根据权利要求1所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述固相抗体反应膜的制备方法如下：固相抗体反应膜上依次包被有检测T线、质控C线，检测T线包被有猴痘单克隆抗体1，质控C线包被有羊抗鼠IgG抗体。

7.根据权利要求6所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述猴痘单克隆抗体1的浓度为1.5mg/mL，羊抗鼠IgG抗体的浓度为1.0mg/mL。

8.根据权利要求1所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法制备的试剂盒，其特征在于：包括检测卡和样本提取液，检测卡包括上盖、下盖和猴痘病毒抗原检测试纸条，猴痘病毒抗原检测试纸条包括样品垫、硅芯金壳结合垫、固相抗体反应膜、吸水纸和PVC板，上盖上设有加样孔和观察窗。

9.根据权利要求8所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法制备的试剂盒，其特征在于：所述固相抗体反应膜粘贴在PVC板上，固相抗体反应膜的两端分别搭接有硅芯金壳结合垫的一端和吸水纸的一端，硅芯金壳结合垫的另一端粘贴在PVC板上，硅芯金壳结合垫的另一端搭接有样品垫的一端，样品垫的另一端粘贴在PVC板上，吸水纸的另一端粘贴在PVC板上。

10.根据权利要求8所述的一种猴痘病毒抗原检测试剂盒的制备方法制备的试剂盒，其特征在于：所述样本提取液包括pH值为8.0的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.5%的酪蛋白、质量百分比为0.05%的S9、质量百分比为0.5%的胆酸、质量百分比为0.9%的NaCl和体积分数为0.05%的Proclin-300。