[发明专利]一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆菌Huang及其应用

说明书

本发明公开了一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆菌Huang及其应用，属于微生物发酵领域。本发明所述耐乙醇贝莱斯芽孢杆菌Huang为发明人自主分离，已于2021年11月8日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO.23761。本发明公布的贝莱斯芽孢杆菌筛选自高度发酵酒，其营养体能够在0%‑8%乙醇下生长，在无水乙醇下存活2 h不形成芽孢，具有较高的乙醇耐受能力。本发明所述的耐乙醇贝莱斯芽孢杆菌，液态发酵中能够产生丰富的酸类、氨基酸物质，有效提高发酵酒的风味及品质，在酿酒领域具有一定的应用价值。

技术领域

本发明涉及一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆菌Huang及其应用，属于微生物发酵领域。

背景技术

芽孢杆菌是发酵酒制作过程中具有较高丰度的功能微生物，对发酵酒的风味品质具有重要贡献，其种类和数量影响发酵进程和酒的风味特征。芽孢杆菌还具有多种降解酶的分泌能力，能够分解淀粉、蛋白质等大分子物质，生成有机酸、氨基酸等小分子物质，提高原料的利用率。此外，芽孢杆菌还能形成双乙酰、含氮化合物等芳香物质，同时为其他风味化合物的形成提供前驱底物，对发酵酒风味的赋予和调控起到重要作用，是多种香型酒特征风味形成的关键微生物。芽孢杆菌的存活形式分为营养体和芽孢，营养体能正常生长繁殖及代谢，但耐受性差，储藏期短，易死亡；而芽孢代谢不活跃，结构高度有序，对多种胁迫环境具有较强的抵抗能力，同时仍保持潜在的萌发力。目前关于芽孢杆菌的文献报道最高能耐受12 %乙醇浓度（如解淀粉芽孢杆菌），而现有专利中报道（公开号为CN112251379B的中国发明专利）贝莱斯芽孢杆菌能够耐受5%乙醇浓度。

在酿酒过程中，逐渐积累的乙醇会抑制芽孢杆菌的生长和代谢，高浓度的乙醇会导致芽孢杆菌形成几乎无代谢活性的芽孢休眠体，进而影响其发挥功效。因此，筛选能够耐受高浓度乙醇的芽孢杆菌营养体对提高发酵酒产品品质尤为重要。

发明内容

本发明从发酵酒样中筛选出芽孢杆菌，经16S rRNA及特异性管家基因gyrB对比分析，鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。该菌株能够分泌蛋白酶及纤维素酶，其代谢产物分析表明，该菌株生长代谢过程中产生大量的氨基酸及其衍生物，有机酸以及核苷酸及衍生物，对发酵酒风味的赋予和营养物质的调控中起到重要作用。对该菌株进行乙醇耐受实验，发现其营养体能在0%~8%乙醇条件下生长，且能在无水乙醇中存活。这表明菌株在发酵酒的酿造过程中具有一定的耐受乙醇能力，进而能够发挥其有益作用。

本发明提供了一株贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）Huang，所述贝莱斯芽孢杆菌Huang保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.23761，保藏日期为2021年11月08日。

所述贝莱斯芽孢杆菌Huang取自酒厂发酵酒样，对菌株进行生理生化试验，16SrRNA分子生物学鉴定并辅以特异性引物gyrB进行辅助鉴定，并以特异性引物kdgK进行验证，以鉴定菌株的种属及分类，其16S rRNA序列具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。所述耐乙醇贝莱斯芽孢杆菌的gyrB序列具有如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。经鉴定，证明本发明的菌株为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），将其命名为贝莱斯芽孢杆菌Huang。

所述贝莱斯芽孢杆菌Huang菌株形态学特征是：菌株菌体在显微镜下呈杆状，单个或成对排列，菌落呈乳白不透明圆状。

所述贝莱斯芽孢杆菌Huang生物学特征为：能利用葡萄糖、甘露醇和明胶，在v-p试验、接触酶试验和氧化酶试验中阳性。

在本发明的一种实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌Huang，其营养体乙醇耐受度为：能够在0 %~8 %乙醇条件下生长，在无水乙醇下能存活至少2 h不形成芽孢。