[发明专利]一种重组猫传染性腹膜炎病毒及其应用有效
| 申请号： | 202210657145.3 | 申请日： | 2022-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN114921424B | 公开（公告）日： | 2023-07-07 |
| 发明（设计）人： | 彭贵青;陈奕熹;沈洲;焦哲;胡小帅 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/86;C12N15/53;G01N33/569;G01N33/58;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理有限公司 11562 | 代理人： | 王宁宁 |
| 地址： | 430070 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 传染性 腹膜炎 病毒 及其 应用 | ||
1.一种重组猫传染性腹膜炎病毒在快速筛选抗猫传染性腹膜炎病毒的药物中的应用；其特征在于，所述重组猫传染性腹膜炎病毒的构建方法包括：利用反向遗传操作平台，将质粒pBAC-FIPV-791146的ORF3区域替换成NanoLuc序列，之后病毒拯救出所述重组猫传染性腹膜炎病毒；
所述质粒pBAC-FIPV-791146的全长基因组序列在GenBank的登录号为MW030109.1；
所述NanoLuc序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种利用重组猫传染性腹膜炎病毒快速筛选抗猫传染性腹膜炎病毒的药物的方法，其特征在于，包括：CRFK细胞进行消化传代后，用细胞生长液稀释，之后接种于96孔板，培养12 h；之后弃去所述96孔板的孔中的培养基，清洗之后在接种CRFK细胞的每孔中，按照体积比9:1，分别加入MOI=0.01的重组猫传染性腹膜炎病毒的稀释液和500μΜ的药物稀释液，继续培养48 h后，取孔中上清检测荧光值；荧光值1×106即为阳性，表示该浓度下的药物对所述重组猫传染性腹膜炎病毒没有抑制作用；
所述重组猫传染性腹膜炎病毒的构建方法包括：利用反向遗传操作平台，将质粒pBAC-FIPV-791146的ORF3区域替换成NanoLuc序列，之后病毒拯救出所述重组猫传染性腹膜炎病毒；
所述质粒pBAC-FIPV-791146的全长基因组序列在GenBank的登录号为MW030109.1；
所述NanoLuc序列如SEQ ID NO.3所示。
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