[发明专利]基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶、制备方法及应用

说明书

本发明涉及技术干细胞以及阴道修复制剂领域，尤其涉及基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶、制备方法及应用。该凝胶包括羧甲基壳聚糖凝胶载体、附着于羧甲基壳聚糖凝胶载体上的子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽，羧甲基壳聚糖凝胶载体具有两个交联结构，分别用于释放所述子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽；阴道修复凝胶以化学键进行相互纠缠形成第一交联结构，经过成晶处理形成第二交联结构。通过将子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽容纳在羧甲基壳聚糖凝胶载体的不同交联结构内，充分利用二者的作用，可用于外用治疗外阴、阴道干燥以及子宫内膜损伤等修复功能。

技术领域

本发明涉及技术干细胞以及阴道修复制剂领域，尤其涉及基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶、制备方法及应用。

背景技术

正常性成熟女性阴道上皮柔软易弯曲，得益于雌激素、乳酸杆菌、阴道pH等维持精密的平衡机制。其可以保持正常水平的水合作用和润滑度。在进行清宫术、诊断性刮宫、子宫内膜消融术、子宫整形术等各种宫腔操作中，如果损伤子宫内膜基底层可导致子宫内膜修复障碍，是薄型子宫内膜形成的重要原因。其中较常见的情况是人工流产后宫腔粘连，即Asherman综合征。子宫内膜长期暴露于孕激素的作用下，可能导致孕激素拮抗雌激素对子宫内膜的增生作用，从而最终引起子宫内膜萎缩，引起细胞微环境改变，不利于子宫内膜的修复。

临床治疗薄型子宫内膜的方法主要有大剂量雌激素治疗、子宫内膜微刺激术、低剂量阿司匹林治疗、己酸己酮可可碱和维生素E治疗、宫内注射粒细胞集落刺激因子治疗、神经肌肉电刺激和生物反馈疗法西地那非治疗、生长激素治疗、中药治疗等。治疗方法虽较多，但总体疗效欠佳，成为生殖医学的一大难点。

子宫内膜干细胞是作为修复子宫内膜的一种新型治疗方向，经血中包含的子宫内膜脱落细胞可在体外分离并培养出子宫内膜间充质干细胞，具有复制快、来源广、取材易、含量多、无创获得等优点，其大量制备子宫内膜干细胞提供支持。然而，现有的子宫内膜干细胞制剂均为液体制剂，在直接抑制后存活率不高，对子宫内膜产生持续再生的作用有限。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于一定程度解决上述技术问题之一。

第一方面，本发明实施例公开了一种基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶，包括羧甲基壳聚糖凝胶载体、附着于所述羧甲基壳聚糖凝胶载体上的子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽，其中，所述羧甲基壳聚糖凝胶载体具有两个交联结构，分别用于释放所述子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽；所述子宫内膜抗菌肽来源于子宫内膜上皮组织，所述子宫内膜抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1～4所示；所述羧甲基壳聚糖凝胶载体以化学键进行相互纠缠形成第一交联结构，经过成晶处理形成第二交联结构。

在本发明实施例中，所述第二交联结构是以中药制剂形成的结晶域。

在本发明实施例中，所述中药制剂以按重量份数计包括苦参100～200份、蛇床子40～50份、金缕梅40～50份、积雪草10～20份、黄连10～20份、黄柏1～5份和乳香1～5份的原材料进行制备得到。

在本发明实施例中，所述子宫内膜干细胞为经过传代培养后高表达CD29、CD44、CD73、CD90和CD105抗原，低表达CD146抗原，不表达CD31、CD34和CD45抗原的传代细胞。

第二方面，本发明实施例公开了第一方面所述的阴道修复凝胶的制备方法，包括获取经传代培养的子宫内膜干细胞、子宫内膜抗菌肽的步骤，制备羧甲基壳聚糖凝胶载体的步骤，以及将所述子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽负载在所述羧甲基壳聚糖凝胶载体上的步骤。

在本发明实施例中，制备羧甲基壳聚糖凝胶载体包括形成第一交联结构以及形成第二交联结构的步骤。

在本发明实施例中，将所述子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽负载在所述羧甲基壳聚糖凝胶载体上的步骤具体包括将子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽加入至含有15％胎牛血清、1％青/链霉素的DMEM/F12培养基中进行培养得到。