[发明专利]基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶、制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶的制备方法，其特征在于，所述基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶，包括羧甲基壳聚糖凝胶载体、附着于所述羧甲基壳聚糖凝胶载体上的子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽，其中，所述羧甲基壳聚糖凝胶载体具有两个交联结构，分别用于释放所述子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽；

所述子宫内膜抗菌肽来源于子宫内膜上皮组织，所述子宫内膜抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述子宫内膜干细胞为经过传代培养后高表达CD29、CD44、CD73、CD90和CD105抗原，低表达CD146抗原，不表达CD31、CD34和CD45抗原的传代细胞；

所述羧甲基壳聚糖凝胶载体以巯基化羧甲基壳聚糖和羧甲基纤维素通过化学键的相互纠缠形成第一交联结构，经过成晶处理，以中药制剂形成结晶域，作为第二交联结构，所述中药制剂以按重量份数计包括苦参100~200份、蛇床子40~50份、金缕梅40~50份、积雪草10~20份、黄连10~20份、黄柏1~5份和乳香1~5份的原材料进行制备得到；

所述第一交联结构中，所述凝胶载体利用其结构中具有自由羧基、氨基或羟基形成氢键或电荷作用，或者利用相邻的巯基形成二硫键进行交联形成第一交联结构；所述第二交联结构中，所述凝胶载体利用其网络结构与中药制剂的混合物进行结晶处理，以让中药制剂的可溶性溶液从液体中析出并在该阴道修复凝胶的网络结构中形成结晶域，从而让其具有第二交联结构；

所述制备方法包括：

获取经传代培养的子宫内膜干细胞、子宫内膜抗菌肽的步骤；

制备凝胶载体的步骤；

将所述子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽负载在所述羧甲基壳聚糖凝胶载体上的步骤；以及

将得到的凝胶溶液进行封装的步骤；

其中，所述制备凝胶载体包括：

将巯基化羧甲基壳聚糖、巯基化羧甲基纤维素和中药溶液混合，于超声下充分分散直至混合液成透明状，在将混合液置于在-20~25℃下冷冻6~8小时，然后在室温下解冻至少10小时，即可形成具有第一交联结构、第二交联结构的凝胶载体；所述中药溶液中的原材料作为形成至该阴道凝胶中的一种药剂，其整体加入的重量为羧甲基壳聚糖和羧甲基纤维素钠总重量的10～20％；

其中，将所述子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽负载在所述羧甲基壳聚糖凝胶载体上的步骤具体包括将子宫内膜干细胞和子宫内膜抗菌肽加入至含有15%胎牛血清、1%青/链霉素的DMEM/F12培养基中进行培养得到。

2.权利要求1所述的制备方法制得的阴道修复凝胶在制备阴道修复、子宫内膜修复、子宫内膜再生、宫腔粘连或子宫内膜异位症相关制剂中的应用。