[发明专利]NRP2激动剂在制备复发性流产治疗药物中的应用

说明书

本发明涉及NRP2激动剂在制备复发性流产治疗药物中的应用。本发明证实了NRP2蛋白能够提高滋养细胞的迁移、侵袭能力及血管新生能力，有助于改善复发性流产等病理妊娠行为，提供了NRP2及其激动剂在制备复发性流产治疗药物中的应用前景。进一步的，本发明还证实了，M2exos中高表达NRP2蛋白，可能通过PI3K‑Akt信号通路调节滋养细胞的生物学行为，有望作为一种NRP2自体来源应用于RSA的治疗。

技术领域

本发明属于复发性流产治疗技术领域，具体涉及NRP2激动剂在制备复发性流产治疗药物中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

妊娠过程的建立和顺利进行受到多种因素的影响，其中母-胎界面免疫耐受状态的形成和维持是正常妊娠的关键因素，一旦免疫耐受微环境出现失调，则可能使胚胎遭受母体免疫细胞的攻击，从而导致不良妊娠甚至复发性流产(recurrent spontaneousabortion，RSA)的发生。在妊娠早期的母-胎界面存在大量来自母体的蜕膜免疫细胞，包括蜕膜自然杀伤细胞(dNK，70％)、蜕膜巨噬细胞(dMФ，20％-30％)、T细胞(10％-20％)及少量的树突状细胞等，这些免疫细胞在胚胎的发育和母胎局部免疫耐受微环境的建立和维持中发挥着重要的调控作用。dNK在妊娠早期呈现明显高表达，但在后期滋养层浸润发生时表现为广泛的凋亡。dMФ作为母-胎界面第二大类免疫细胞，其表达水平则在整个妊娠过程中一直维持着较为稳定的高表达。蜕膜巨噬细胞根据其功能和分泌的相关细胞因子主要分为经典活化型和选择性活化型。M1型巨噬细胞主要发挥促炎作用，可表达较高水平的IL-12和IL-23以及较低水平的IL-10，并诱导Th1免疫。而M2型巨噬细胞则表达较高水平的IL-10，较低水平的IL-12和IL-23，发挥抗炎作用。而母-胎界面的dMФ以M2型巨噬细胞为主，母胎免疫耐受状态的维持依赖于蜕膜M1、M2型巨噬细胞比例保持动态平衡，蜕膜巨噬细胞的异常极化则可能影响滋养细胞的侵袭及子宫血管重构等，最终导致流产的发生。

外泌体(exosome)作为细胞间交流的重要媒介，而且有研究发现，外泌体也可在母胎之间传递重要的信号分子，为胚胎的着床及发育造就适宜的宫内环境，但其中具体的调节机制目前还知之甚少。此外也有许多研究发现，巨噬细胞来源的外泌体可以通过传递生物分子至肿瘤细胞调控靶细胞基因的表达，进而影响肿瘤细胞侵袭、迁移及转移能力。鉴于蜕膜M2型巨噬细胞和滋养细胞在维持正常妊娠中的重要作用，以及外泌体可以作为独特的生物分子转运载体参与母体与胚胎间的信息交流。在母-胎界面微环境当中，外泌体也在胚胎植入及正常妊娠的维持中发挥重要作用。

神经纤毛蛋白2(neuropilins 2，NRP2)是NRP家族(NRPs)中的一个亚型，作为一种非酪氨酸激酶受体，在免疫系统及细胞迁移中具有重要作用，可介导肿瘤的淋巴管生成及肿瘤细胞淋巴管转移。同时NRP2作为内皮生长因子(VEGF)的受体，可参与调控新生血管的形成过程。研究显示，在肝癌、肺癌、结直肠癌等多种肿瘤细胞中NRP2呈现高水平表达，发挥促进肿瘤细胞的迁移、侵袭和转移的作用。因此NRP2的表达水平往往与机体的疾病状态相关。然而NRP2在母胎调控中的作用尚鲜有报导，有待于进一步的探究。

发明内容

本发明通过体外研究手段，分析NRP2蛋白对滋养细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响，进一步验证了M2型巨噬细胞的外泌体(M2 exos)通过补充NRP2蛋白从而实现对复发性流产的治疗作用。随后进一步采用高通量测序技术、生物信息学分析、qRT-PCR等实验技术重点探究NRP2调控滋养细胞生物学功能的具体分子机制，利用自然流产模型孕鼠验证了M2 exos对小鼠胚胎生长发育的影响。初步明确了NRP2能够促进滋养细胞中PODXL、SERPINE1、ANGPTL4等基因的表达从而调控滋养细胞的迁移、侵袭及血管生成。本研究为阐明独特的母胎调节和耐受机制提供了新的研究思路，并为复发性流产的诊疗方案的开发提供了新的靶点。