[发明专利]一种特异性识别新型冠状病毒N蛋白的核酸适配体及其应用

权利要求书

1.一种特异性识别新型冠状病毒N蛋白的核酸适配体，其特征在于，包括核酸适配体apt1和核酸适配体apt2，核酸适配体apt1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，核酸适配体apt2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述核酸适配体在制备新型冠状病毒检测产品或新型冠状病毒药物载体中的应用。

3.一种用于检测新型冠状病毒N蛋白的胶体金核酸适配体试纸条，其特征在于，包括依次搭接于底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合垫上包被有胶体金标记的核酸适配体探针apt1-A，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有核酸适配体apt-T捕获探针，其核苷酸序列如SEQID NO.4所示；所述质控线上包被有质控探针apt-C，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

4.根据权利要求3所述试纸条，其特征在于，所述核酸适配体探针apt1-A的5’端被磷酸化、巯基化、甲基化、氨基化或同位素化。

5.一种非疾病诊断目的的检测新型冠状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.孵育：将捕获适配体APT2和扩增适配体APT1与待测样品一起孵育得到孵育混合液；所述捕获适配体APT2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，其3’端修饰有生物素；所述扩增适配体APT1的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

S2.链置换扩增反应：在步骤S1所得孵育混合液中加入链霉亲和素修饰的磁珠，振荡反应得到捕获适配体-目标蛋白-扩增适配体-磁珠复合物，再利用所得捕获适配体-目标蛋白-扩增适配体-磁珠复合物与SDA引物进行链置换扩增反应；

S3.检测：将步骤S2链置换扩增反应所得产物滴加在权利要求3所述胶体金核酸适配体试纸条的样品垫上，观察显色结果；

S4.判断结果：若胶体金核酸适配体试纸条上的检测线和质控线都显示为红色时，检测结果为阳性；当检测线不显色，质控线显示为红色时，检测结果为阴性；当质控线不显色时，无论检测线显不显示红色，检测结果都判断为无效。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤S1中所用捕获适配体和扩增适配体的使用浓度为180～220nM，孵育温度为4℃，孵育时间为20～40min。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤S2所述链置换扩增反应中所用SDA引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

8.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤S2所述链置换扩增反应的反应体系为超纯水12.5μL、SDA引物2μL、buffer 2μL、dNTPs 2μL、聚合酶0.8μL、切刻内切酶Nt.BbvCI 0.7μL。

9.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤S2所述链置换扩增反应的反应条件为37～50℃，20～30min。

10.一种检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求3或4所述用于检测新型冠状病毒N蛋白的胶体金核酸适配体试纸条，SEQ ID NO.6所示扩增适配体APT1，SEQ ID NO.2所示捕获适配体APT2，SEQ ID NO.7所示SDA引物和链置换扩增反应所需试剂。