[发明专利]用于检测妇科疾病外源病原体的多重qPCR检测试剂

说明书

本发明公开了一种用于检测妇科疾病外源病原体的多重qPCR检测试剂，其包括检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、弓形虫、解脲脲原体、结核分枝杆菌、阴道毛滴虫、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒2型的特异性引物和探针；本发明利用不同荧光标记的探针在一个反应体系中加入多种病原体的特异性引物和探针同时检测多个靶标，该方法具有特异性好、灵敏度高、检测周期短，可同时检测多种病原体，更加迅速、简便、经济的优点，为妇科病原体的快速检测提供了便捷方法，对流行病学研究及临床早期分子诊断等具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及检测引起妇科疾病的外源性致病菌的多重qPCR方法的建立与应用，利用多重qPCR检测8种引起妇科疾病的外源性致病菌。

背景技术

妇科疾病是女性生殖系统病变的总称，多数女性一生中存在不同程度或不同种类的妇科疾病，常见的妇科感染疾病有阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎、卵巢炎和卵巢脓肿、盆腔炎、生殖器结核、炎性盆腔包块与盆腔疼痛、以及性传播疾病 (sexuallytransmitted disease, STD)。 目前，列入重点防治的性病是梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹、软下疳、性病淋巴肉芽肿和艾滋病等。

引起这些妇科疾病的外源性致病菌主要包括8种，分别是沙眼衣原体(CT )、淋病奈瑟菌(NG)、弓形虫(TG)、解脲脲原体（Uu）、结核分枝杆菌(MTB)、阴道毛滴虫（TV）、巨细胞病毒(CMV)和单纯疱疹病毒2型(HSV-2)。沙眼衣原体在生殖道慢性感染时，潜伏在细胞内的病原体可逃避机体的免疫防御机制，而长时间存在，可由官颈上行到子宫和输卵管，引起无症状的上生殖道感染，导致异位妊娠和原发性不育。淋病奈瑟菌被认为是一种人类专性病原体，可以在女性的子宫颈、子宫和输卵管等粘膜以及男性尿道中生长和繁殖，这种细菌会导致淋病，这是一种传染性极强的几乎完全是性传播感染的疾病。弓形虫和巨细胞病毒在怀孕期间传播，可导致宫肉感染和胎儿先天性异常，弓形虫是一种寄生虫，可引起胎儿脑积水、颅内钙化和脉络膜视网膜炎，如果它在怀孕期间从母亲传给胎儿，则称为先天性弓形虫病。解脲脲原体可能定植于人类生殖道，并与不良妊娠结局相关，新生儿可能会出现脲原体相关的肺部疾病、菌血症和脑膜炎。女性生殖器官的结核感染可导致不孕，性交困难、月经不调和慢性盆腔炎(PID)，泌尿生殖系统结核病是世界范国内常见的肺外结核病(EPTB)(27%)，仅生殖器结核病就占所有EPTB病例的9%。阴道毛滴虫感染可引起滴虫性阴道炎，滴虫性阴道炎是全世界最流行的非病毒性性传播疾病，是一种普遍存在的全球健康问题，并且发病率越来越高，阴道毛滴虫感染在育龄妇女中普遍存在，感染可能导致泌尿生殖道慢性炎症，甚至可能导致不孕。巨细胞病毒是疱疹病毒科中最大的病毒之一，母亲怀孕期间感染可能会导致胎儿出现智力低下、脉络膜视网膜炎和胎儿脑钙化等后遗症。HSV2的原发感染主要引起生殖器疱疼，女性为宫颈、外阴、阴道的水泡性溃疡损伤，并发症包括生殖器外损伤和无菌性脑膜炎，新生儿疱疹是临床上常见交叉严重的感染，HSV2在分娩时通过产道感染新生儿。

临床上常用检测方法包括免疫学方法、涂片镜检法以及分离培养法，具有检出率低、特异性差、耗时长的缺点。常规的qPCR，在一个反应管中仅检测单一指标，如果检测的指标很多或者检测的样本很多，对qPCR试剂以及样本无疑是一种巨大的浪费，在多重qPCR中，单个管扩增检测多个靶标；因此，可以快速测量几个靶标或目的基因的表达水平这种多个指标在单个反应管中同时完成检测的方法极大地减少了相关试剂的用量，即使拥有足够的qPCR酶，多重qPCR也会节省样本处理时间及其他试剂耗材。

发明内容