[发明专利]一种用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物，其特征在于，所述mRNA药物包括由IL-21mRNA和脂质制成的脂质纳米颗粒LNP-IL-21；其中，所述IL-21mRNA用于表达IL-21蛋白或其突变体，所述脂质用于递送mRNA。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物，其特征在于，所述IL-21基因为编码IL-21蛋白或其突变体的人源或鼠源基因序列。

3.根据权利要求2所述的一种用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物，其特征在于，所述IL-21基因为人源基因，其序列为GenBank Accession Number：NP_068575.1；或，所述IL-21基因为鼠源基因，其序列为GenBank Accession Number：NM_021782.2。

4.根据权利要求1所述的一种用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物，其特征在于，所述脂质包括阳离子脂质、修饰的PEG、胆固醇和磷脂酰胆碱。

5.根据权利要求4所述的一种用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物，其特征在于，所述阳离子脂质、修饰的PEG、胆固醇和磷脂酰胆碱的摩尔比为40～50：1～2：38～48：6～12；和/或，所述IL-21mRNA和脂质的质量配比为1：5～35。

6.根据权利要求4所述的一种用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物，其特征在于，所述阳离子脂质为ALC-0315，所述修饰的PEG为DMA-PEG2000，所述磷脂酰胆碱为二硬脂酰磷脂酰胆碱；所述阳离子脂质、修饰的PEG、胆固醇和磷脂酰胆碱的摩尔比为46.3：1.6：42.7：9.4，所述IL-21mRNA和脂质的质量配比为1：25。

7.一种如权利要求1～6中任一项所述的用于治疗慢性乙型肝炎病毒感染的mRNA药物的制备方法，其特征在于，包括步骤：

步骤1)IL-21mRNA的制备：根据IL-21基因制备IL-21mRNA；

步骤2)LNP-IL-21的制备：将所述IL-21mRNA与脂质混合，制得LNP-IL-21。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述IL-21mRNA的制备具体包括步骤：将IL-21基因克隆至体外转录质粒，将所构建的线性化的重组质粒进行体外转录获得IL-21mRNA；

和/或，所述步骤2)中，所述LNP-IL-21的制备具体包括步骤：将预定摩尔比的阳离子脂质、修饰的PEG、胆固醇和二饱和磷脂酰胆碱溶解在乙醇中，获得乙醇相；将IL-21mRNA溶解在柠檬酸盐缓冲液，获得水相；使用微流体混合器以预定的流速比及总流速混合所述乙醇相和水相，实现IL-21mRNA的LNP包装；使用超滤离心管对LNP-IL-21进行渗滤，收集样品，用PBS缓冲液稀释并储存。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述体外转录质粒为pCZ质粒，所述pCZ质粒包含5'非翻译区、3'非翻译区以及polyA尾；采用BspQI将pCZ质粒线性化，并使用T7聚合酶在体外转录合成IL-21mRNA；和/或，所述IL-21mRNA采用1-甲基假UTP取代UTP，并添加帽结构。

10.一种如权利要求1～5中任一项所述的mRNA药物、或者由权利要求6～9中任一项所述的制备方法制得的mRNA药物的应用，其特征在于，所述应用选自以下应用中的至少一种：LNP-IL-21在制备治疗性mRNA乙型肝炎病毒疫苗中的应用、LNP-IL-21在制备治疗慢性乙型肝炎病毒感染的产品中的应用。