[发明专利]特异性识别黄曲霉毒素M1的适配体及其筛选方法与应用

权利要求书

1.特异性识别黄曲霉毒素M1的适配体，其特征在于，所述适配体的核苷酸序列如SEQID No.1、SEQ ID No.2所示。

2.筛选用于特异性识别黄曲霉毒素M1的适配体的单链DNA文库，其特征在于，所述单链DNA文库为在5'-CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT-N51-GGAGAATGAGGAACCCAGTGCAG-3'的基础上，将能形成茎-环结构的序列片段5'-TTTTGTCTCTCTGTGTCTTTT-3'插入到N51的随机区域，构成的五段式初始ssDNA文库；所述N51表示由51个任意的核苷酸碱基连接而成的序列。

3.根据权利要求2所述的单链DNA文库，其特征在于，所述单链DNA文库的结构是5'-CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT-N10-TTTTGTCTCTCTGTGTCTTTT-N20-GGAGAATGAGGAACCCAGTGCAG-3'；所述N10表示由10个任意的核苷酸碱基连接而成的序列，所述N20表示由20个任意的核苷酸碱基连接而成的序列。

4.如权利要求2-3任一所述单链DNA文库在筛选用于特异性识别黄曲霉毒素M1的适配体中的应用。

5.用于特异性识别黄曲霉毒素M1的适配体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)随机单链DNA文库与靶标孵育

向随机单链DNA文库中加入黄曲霉毒素M1，混合孵育，使随机单链DNA文库与黄曲霉毒素M1充分结合，形成孵育混合液；氧化石墨烯与所述孵育混合液混合，孵育后固液分离取上清液，获得与靶标结合的ssDNA；

(2)PCR扩增

将步骤(1)中所得ssDNA作为模板进行PCR扩增；

(3)制备单链

将步骤(2)的扩增产物制备成单链DNA，得到下一轮筛选文库；

(4)多轮筛选

将步骤(1)的随机单链DNA文库替换为步骤(3)中所述下一轮筛选文库，按照步骤(1)-(3)重复多轮筛选；

(5)高通量测序

筛选结束后，将步骤(3)中最后一轮筛选所得的筛选文库进行高通量测序分析，检测所得序列与黄曲霉毒素M1的亲和力和特异性，得到用于特异性识别黄曲霉毒素M1的核酸适配体。

6.根据权利要求5所述的筛选方法，其特征在于，步骤(4)中，所述多轮筛选是通过降低文库浓度来增加筛选压力。

7.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的适配体。

8.如权利要求7所述的试剂盒、权利要求1所述的适配体在检测黄曲霉毒素M1中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述适配体序列中的5’端或3’端连接功能性基团或分子。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述功能性基团或分子选自荧光素、生物素、氨基、巯基、地高辛、放射性同位素、酶标记或纳米发光材料。