[发明专利]增强内皮细胞通透性的仿生纳米载体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种增强内皮细胞通透性的仿生纳米载体及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明的制备方法包括以下步骤：制备外泌体：取可表达CD63‑VEGF的间充质干细胞株，培养，取含有外泌体的培养液，提纯，得到VEGF工程化外泌体；制备冰片脂质体：以卵磷脂、胆固醇和冰片为原料制备冰片脂质体；融合：将VEGF工程化外泌体和冰片脂质体混合均匀，经数次冷冻和解冻循环，即得仿生纳米载体。本发明的仿生纳米载体具有增强内皮细胞通透性的作用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种增强内皮细胞通透性的仿生纳米载体及其制备方法和应用。

背景技术

血管内皮细胞是血液中物质从血液到达组织的一道屏障，其允许小分子药物从血液进入到组织中，而大分子药物通常无法穿过内皮屏障，除非发生了渗漏。因此，现在很多药物递送策略仅能针对于实体肿瘤的治疗。

静脉给药是一种非常重要和有效的给药方式，但因为血管内皮细胞的存在，导致大分子量的物质无法渗透出血管，只有当血管内皮的通透性显著增强时，蛋白质、核酸、纳米药物等才能大量穿过内皮进入组织。而大多数疾病状态下，病灶处血管内皮都保持着完整的结构和功能，导致大分子药物难以大量递送至病灶区。因此，克服血管内皮障碍是药物递送要解决的一大难题。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种增强内皮细胞通透性的仿生纳米载体的制备方法，制得的仿生纳米载体具有增强内皮细胞通透性的作用。

一种增强内皮细胞通透性的仿生纳米载体的制备方法，包括以下步骤：

制备外泌体：取可表达CD63-VEGF的间充质干细胞株，培养，取含有外泌体的培养液，提纯，得到VEGF工程化外泌体；

制备冰片脂质体：以卵磷脂、胆固醇和冰片为原料制备冰片脂质体；

融合：将VEGF工程化外泌体和冰片脂质体混合均匀，经数次冷冻和解冻循环，即得仿生纳米载体。

上述制备方法将VEGF工程化外泌体和冰片脂质体融合得到具有增强内皮细胞通透性的仿生纳米载体。VEGF工程化外泌体中的VEGF有促进细胞迁移和增强通透，可促进细胞迁移，增强通透性；冰片脂质体不仅具有透皮、增强通透的作用，还可解决载体不溶于水、易挥发的问题。

本发明制备的仿生纳米载体具有促进内皮细胞迁移，扰乱内皮细胞紧密连接的作用，有助于靶向增强特定区域血管内皮的渗透性，增强系统给药在特定部位的输送效率。

在其中一个实施例中，所述制备外泌体步骤中，采用完全培养基进行培养，所述完全培养基以MEM-a培养基为基底液，并包含FBS、双抗、ITS细胞培养添加物、成纤维细胞生长因子、干细胞生长因子和莫能菌素钠。

在其中一个实施例中，所述制备外泌体步骤中，培养周期为25～35天，培养过程中，当检测到培养液中葡萄糖含量下降至初始完全培养基中葡萄糖含量的一半时更换培养基。

在其中一个实施例中，所述制备冰片脂质体步骤中，所述卵磷脂、胆固醇和冰片的质量比(18～22)：(4～6)：(1～3)。

在其中一个实施例中，所述制备冰片脂质体步骤具体为：取卵磷脂、胆固醇和冰片，溶于乙醇中，混合均匀，旋转蒸发除去乙醇，48～52℃水化28～32min，超声分散8～12min，过0.22μm滤膜，得到冰片脂质体。

在其中一个实施例中，所述融合步骤中，所述VEGF工程化外泌体和冰片脂质体的用量体积比为1：(0.8～1.2)，每次冷冻置于液氮中冷冻8～12h，每次解冻置于20～30℃下解冻10～20min。

本发明还提供一种采用本发明所述的制备方法得到的仿生纳米载体。