[发明专利]萤火虫荧光素酶标记的马尔尼菲篮状菌菌株及构建方法

权利要求书

1.一种萤火虫荧光素酶标记的马尔尼菲篮状菌菌株，命名为TM-LUC菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究院，其微生物保藏号是：CGMCCNo.10452，保藏时间为2022年3月25日。

2.一种萤火虫荧光素酶标记的马尔尼菲篮状菌菌株的构建方法，其特征在于，包括：

S1、构建萤火虫荧光素酶重组质粒；

S2、转入TM的基因组。

3.根据权利要求2所述一种萤火虫荧光素酶标记的马尔尼菲篮状菌菌株的构建方法，其特征在于，所述步骤S1包括质粒构建，具体有：

S11、luciferase片段扩增，以pGL3-basic质粒为模板，设计引物并扩增luciferase片段；

S12、NcoI，BstEII酶切pCAMBIA1303-TrpC-Hygro-gpdA-GFP载体骨架；

S13、重组连接，将回收的PCR产物(luciferase片段)与酶切后回收的pCAMBIA1303-TrpC-Hygro-gpdA-GFP载体骨架进行重组连接；

S14、重组产物鉴定，挑取重组反应转化平板上若干个克隆进行菌落PCR鉴定。

4.根据权利要求2所述一种萤火虫荧光素酶标记的马尔尼菲篮状菌菌株的构建方法，其特征在于，所述步骤S2包括：

S21、农杆菌转化培养，包括：

210、取EHA105感受态细胞加入质粒DNA(pCAMBIA1303-TrpC-Hygro-gpdA-Luc)，混匀；

211、加入无抗生素的LB液体培养基，于28℃振荡培养2～3小时；

212、离心收菌，留取上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天，挑取阳性克隆至LB培养基中，28℃震荡；

S22、农杆菌侵染马尔尼篮状菌，包括：

221、将TM中按照1％比例加入含有质粒(pCAMBIA1303-TrpC-Hygro-gpdA-Luc)的EHA105菌液，28℃震荡培养24h；

222、共培养后的菌液加入玻璃珠，震荡打碎成团的菌体，然后涂布至含有潮霉素的固体沙氏葡萄糖培养基平板中，37℃培养箱培养至有明显单克隆长出；

223、将单克隆转化子转接至新的含潮霉素的液体沙氏培养基中，37℃培养箱中震荡培养至对数生长期，提取基因组后进行鉴定。

5.根据权利要求2所述的方法构建的萤火虫荧光素酶标记的马尔尼菲篮状菌菌株。

6.根据权利要求1或5所述萤火虫荧光素酶标记的马尔尼菲篮状菌菌株在制备预防或治疗TM感染的药物中的应用。