[发明专利]一种磺胺甲恶唑荧光探针、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种磺胺甲恶唑荧光探针、制备方法及其应用，包括如下步骤：(1)磺胺甲恶唑(Sulfamethoxazole，SMX)荧光探针储备液的制备；(2)磺胺甲恶唑荧光探针工作液的制备；(3)人结肠腺癌细胞系Caco‑2、人非小细胞肺癌细胞系A549的培养；(4)磺胺甲恶唑荧光探针工作液处理Caco‑2和A549细胞；(5)荧光成像；(6)数据分析。本发明采用荧光标记手段，在生物体细胞内实现对磺胺甲恶唑分布的准确观察，从而为评估磺胺甲恶唑对生物体细胞的影响提供理论支持，该方法操作步骤简单、准确度高、实验周期短、荧光稳定性好、样品穿透性强，能够快速、真实、清楚地评价磺胺甲恶唑在生物体细胞内的分布情况。

技术领域

本发明涉及抗生素检测领域，具体涉及一种磺胺甲恶唑荧光探针、制备方法及其应用。

背景技术

我国是世界上最大的抗生素生产国和使用国，抗生素的肆意滥用导致了我国水体和土壤等环境介质中抗生素含量高于国际平均水平，抗生素污染已成为我国亟待解决的环境问题。残留的抗生素在环境介质中不断迁移和转化，经过食物链的富集和传递，抗生素以游离或结合形式残留在动物组织中，并最终进入人体，从而危害人类健康。作为当前环境中被检测到的一种典型抗生素，磺胺类抗生素磺胺甲恶唑(Sulfamethoxazole，SMX)已被世界卫生组织下属的国际癌症研究机构列入3类致癌物清单。磺胺甲恶唑，化学名为N-(5-甲基-3-异恶唑基)-4-氨基苯磺酰胺，为白色结晶状粉末，无臭，味微苦。近年来，磺胺甲恶唑等磺胺类药物因制造成本低、产量大、价格低等优点，被广泛应用于预防和治疗感染性疾病；此外，磺胺甲恶唑化学性质稳定，不易分解，是具有良好生物体吸收性的广谱抗菌剂，在抵抗葡萄球菌、大肠杆菌和霍乱弧菌等感染的同时，还可以促进畜禽生长，所以一直在我国的畜牧养殖业中广泛使用，导致其在食品中残留的现象愈发严重，进而可能致使人体摄入过量。然而，磺胺甲恶唑不易排出体外，在人体内蓄积会引起过敏反应、造血功能紊乱、消化系统受损以及肾脏损伤等危害，严重影响人的身体健康。

目前，磺胺甲恶唑的常规检测方法主要包括紫外可见分光光度法、高效液相色谱法及与质谱技术联用法、生物检测法等相关检测方法，例如相关申请专利：中国发明专利CN202011402903.4公开了一种利用高效液相色谱-串联质谱检测蔬菜中抗生素残留量的方法，同时分析了磺胺类、喹诺酮类及四环素类等抗生素的浓度。中国发明专利CN202111014349.7公开了一种利用草履虫生物标志物及整合生物标志物分析(IBR)评价磺胺甲恶唑环境风险的方法，通过提取草履虫生物标志物，利用IBR检测方法评估磺胺甲恶唑环境浓度。但是这些技术方法只能实现对磺胺甲恶唑浓度的测定，普遍存在方法繁琐、价格较高、无法实现原位观察等缺点。

除了上述常规检测方法，荧光检测技术也被运用在抗生素的检测中，例如：中国发明专利CN201810121339.5公开了一种近红外抗生素荧光探针检测试剂，利用近红外碳量子点等荧光纳米材料和抗生素之间形成的内滤效应的原理而构建一种荧光纳米探针试剂，用于检测四环素类和喹诺酮类抗生素。中国发明专利CN201710762943.1公开了一种利用多色荧光碳点可视化检测多种抗生素的荧光检测指示卡，通过制备多种性质的荧光碳点检测食品中残留的恩诺沙星、氯霉素以及四环素等抗生素。这些技术虽然实现了对于抗生素的直接观察，但是存在成本较高、操作复杂、实验周期较长等缺点，特别是未应用于观察生物体细胞内抗生素分布的场境中。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本发明。

发明内容

本发明的目的在于解决现有的技术在对抗生素进行检测时存在成本较高、操作复杂、实验周期较长、无法实现抗生素在生物体细胞内原位观察的问题，提供了一种磺胺甲恶唑荧光探针、制备方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明公开了一种磺胺甲恶唑荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

S1：将4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑溶液和磺胺甲恶唑溶液混合，然后加入硼酸缓冲液得到混合液；