[发明专利]HER2/CEP17基因检测探针及其应用

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及HER2/CEP17基因检测探针及其应用。本发明通过对多个核酸片段进行筛选，获得最优标记效果的探针。本发明提供的探针基于FISH技术对样品进行检测，将其作为乳腺癌诊断的试剂，能够获得更准确、更灵敏的检测效果。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及HER2/CEP17基因检测探针及其应用。

背景技术

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，是由乳房组织发展成的癌症。研究表明，一种受体型的酪氨酸激酶-人类表皮生长因子受体2(HER2)在20％～30％的原发性乳腺浸润性导管癌中有基因的扩增和蛋白的过度表达。HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。《2005 St Gallen国际治疗指南》指出，在乳腺癌风险级别评估因子当中，虽然淋巴结状态仍然是最重要的因素，但HER2状态直接影响风险的级别。当淋巴结阴性或只有1～3个淋巴结有转移时，如HER2过表达或基因扩增则风险级别分别由低上升为中，中上升为高。另外，把HER2状态作为乳腺癌药物(环磷酞胺、阿霉素、5-氟尿嚓咙和曲妥珠单抗)治疗的主要参考指标。曲妥珠单抗(赫赛汀)是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，选择性地作用于HER2的细胞外部位，适用于治疗HER2过度表达的乳腺癌。由于只有HER2过度表达和基因扩增的乳腺癌患者用曲妥珠单抗治疗才有效，因此正确检测和评定乳腺癌的HER2状态至关重要。

HER2基因位于17号染色体上，大约有47％的乳腺癌存在17号染色体非整体性(aneusomy)，即17号染色体不是正常的二体(2条17号染色体)，而是单体(1条17号染色体)或多体(3条或以上17号染色体)。在检测中应将17号染色体的非整体性和单纯的HER2基因扩增，尤其是低水平的扩增区分开。当HER2基因与17号染色体数目比值大于2时，即为HER2基因扩增。因此，在检测HER2的同时检测17号染色体着丝粒作为对照，就排除了单色探针(探针中仅有HER2基因)可能造成的假阴性(17号染色体单体)或假阳性(17号染色体多体)。

当HER2/CEP17比值＞2.0时，为HER2阳性；HER2/CEP17比值2.0，但平均HER2拷贝数/细胞≥6.0时也为HER2阳性。扩增细胞应均质、连续，且占浸润癌的10％以上。需要注意的是对于HER2/CEP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数/细胞4.0的病例是否应该视为ISH阳性目前尚存一定争议。

目前一般采用免疫组织化学(IHC)检侧HER2受体蛋白过度表达，应用荧光原位杂交(fluorescence in situhybridization,FISH)和显色原位杂交(chromogenic insituhybridization,CISH)法检测HER2基因扩增的水平。其中，FISH是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。在荧光显微镜下，于细胞和(或)组织原位观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的多种彩色探针信号，以获得细胞内多条染色体(或染色体片段)或多种基因状态的信息。临床使用美国FDA已经批准的探针对HER2进行检测，但其标记效果仍有待进一步提高。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供标记效果更好的尤其涉及HER2/CEP17基因检测探针及其应用。

本发明提供了HER2基因的检测探针，其为17号染色体上第39655584位～39817309位核酸。

本发明所述的HER2基因的检测探针来自HER2基因的BAC克隆。本发明所述的HER2基因的检测探针即为命名为RP11-94L15的BAC克隆。经验证，该探针的标记效果优于HER2基因的BAC克隆：CTD-2019C10、RP11-1044P23或RP11-62N23。

本发明所述HER2基因的检测探针上标记orange 552dUTP。