[发明专利]人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒

说明书

本发明涉及抑制剂检测技术领域，提供了一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒。本发明包括校准品、质控品、内标准液、提取剂、QuEChERS净化材料、盐析剂、流动相A液、流动相B液、复溶液、隔水包装袋及其分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。本发明将QuEChERS技术和液质联用技术相结合，样品用量少，且结果准确、可靠、灵敏，适合适合同时检测多种具有抗肝癌作用的TKIs；而且试剂盒具备操作简便、容易推广的优点，可以避免自配试剂过程中引起的实验误差，从而提高临床检测质量。

技术领域

本发明属于抑制剂检测技术领域，具体是一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒。

背景技术

酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor，TKIs)的作用机制是与三磷酸腺苷(ATP)竞争激酶域的结合位点并降低酪氨酸激酶的磷酸化，从而抑制癌细胞增殖。TKIs与传统的细胞毒类抗癌药比较，具有高选择性，不良反应少等特点，广泛用于小细胞肺癌，非小细胞肺癌，胃肠间质瘤，肝细胞肝癌，肾癌等癌症。目前，TKIs在癌症治疗方面取得了很大进展，TKIs与肝动脉化疗栓塞术的联合治疗相比于单一肝动脉栓塞化疗术效果更好，能有效降低不良反应的发生率。

尿液是小分子代谢物研究中常用的生物液体，样品复杂性低，前处理相对简单，且尿液中代谢物丰富，在进行分析前只需准备少量样本，采集简单且无创。因此，本发明针对人体尿液样本建立同时检测肝癌患者尿液中9种 TLIs的方法，较全面的涵盖了当前具有抗肝癌作用的TKIs，对临床治疗药物监测具有重要意义。

目前，国内外文献中报道了多种分析方法用于检测小分子酪氨酸激酶抑制剂，主要包括高效液相色谱法(high performance liquid chromatography， HPLC)、薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)、酶联免疫分析法 (enzyme-linked immuno sorbentassay，ELISA)、气相色谱串联质谱法(Gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS/MS)和液相色谱串联质谱法 (liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS/MS)等。其中，LC-MS/MS 结合了色谱的分离能力和质谱的分析能力，且具有动态范围大、分析速度快、灵敏度高、检出限低等优点，是小分子代谢物分析的关键技术。同时，检测时需要样品有良好的基质效应，因此需要选择合适的前处理技术，以提高净化效率，减小杂质影响。QuEChERS是由分散固相萃取(dSPE)衍生出的一种新兴的前处理技术，具有回收率高，操作简单等优点，最初用于农药残留领域，近年来，随着该技术的改良和发展，逐渐应用于尿液、血浆和组织等生物基质中代谢物和其他化合物的分析。

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种预后不佳的疾病，具有发病率高，死亡率高和早期不易发现的特点。本发明同时检测的9种酪氨酸激酶抑制剂，都是具有抗肝癌作用的小分子靶向药物。尽管分子靶向治疗在晚期肝癌的治疗中发挥着不可替代的作用，但获得耐药性和药物毒性仍然不可避免，因此也限制了癌症的治疗。于是需要对治疗药物进行监测，辅助临床用药指导，及时调整给药剂量，提高药物疗效和安全性。

因此，临床检测亟需一种不仅具备高灵敏度，高特异性，高准确度检测结果，还可以同时检测多种具有抗肝癌作用的TKIs，并拥有操作简单方便，容易推广的TKIs直接检测方法及试剂盒，本发明通过将QuEChERS前处理方法与高效液相色谱串联质谱联用，来减小基质效应和化合物不稳定性对实验结果的影响，从而提高临床检测质量。

发明内容

本发明的目的是针对以上问题，提供了一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、内标准液、提取剂、QuEChERS净化材料、盐析剂、流动相A液、流动相B液、复溶液、隔水包装袋及其分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。