[发明专利]人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒

权利要求书

1.一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、内标准液、提取剂、QuEChERS净化材料、盐析剂、流动相A液、流动相B液、复溶液、隔水包装袋及其分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒；

QuEChERS净化材料：30-60mg C18，用隔水包装袋封装；

盐析剂：10-40mg氯化钠、50-100mg无水硫酸镁，用隔水包装袋封装。

2.根据权利要求1所述的一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，

校准品：使用甲醇稀释液，同时加入替万替尼、Galunisrtib、索拉非尼，伦伐替尼，瑞戈非尼，卡博替尼，安罗替尼，阿帕替尼和吉非替尼的标准品，配制成7个浓度剂量点的校准品A-G，其中替万替尼和Galunisrtib的浓度分别为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、80ng/mL、100ng/mL，索拉非尼、伦伐替尼、瑞戈非尼、卡博替尼、安罗替尼、阿帕替尼和吉非替尼的浓度分别为0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、8ng/mL、10ng/mL；

质控品：使用甲醇稀释液，同时加入替万替尼、Galunisrtib、索拉非尼，伦伐替尼，瑞戈非尼，卡博替尼，安罗替尼，阿帕替尼和吉非替尼的标准品，配制成3个浓度的质控品C1-C3，其中替万替尼和Galunisrtib的浓度分别为2ng/mL、50ng/mL、100ng/mL，索拉非尼、伦伐替尼、瑞戈非尼、卡博替尼、安罗替尼、阿帕替尼和吉非替尼的浓度分别为0.2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL；

内标准液：使用甲醇作为稀释液，将普萘洛尔稀释至终浓度为5ng/mL；

提取剂：1-3mL乙腈；

流动相A：为纯乙腈；

流动相B：由甲酸与纯化水配制而成，甲酸的含量为0.05％-0.2％；

复溶液：由甲醇和纯化水配制而成，甲醇的含量为50％-100％。

3.根据权利要求1或2任一所述的一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，

所述提取剂中尿液：乙腈＝1：2，乙腈的用量为2mL；

所述C18的用量为50mg；

所述盐析剂中氯化钠的用量为20mg，无水硫酸镁的用量为80mg；

所述流动相B中甲酸的含量为0.1％；

所述复溶液中甲醇的含量为100％。

4.根据权利要求1所述的一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，其使用方法包括以下步骤：

(1)准备工作液：用甲醇分别稀释试剂盒中的校准品、质控品、内标准液，分别制成校准品工作液、质控品工作液、内标工作液；

(2)样品前处理：取1mL的尿液样品与10μL的内标工作液混合，依次加入提取剂、QuEChERS净化材料和盐析剂，混合均匀后离心分离上清，氮气室温彻底吹干，加入1mL复溶液至溶解完全；

(3)混匀：将步骤(2)中得到的溶液用涡旋混匀器充分混合1min；

(4)转移：取复溶后的溶液200μL转移至液相小瓶中，待测；

(5)设置色谱和质谱条件：根据实际仪器型号分别设置超高效液相色谱和串联质谱仪的工作参数和条件；

(6)样品检测：将处理好的校准品工作液、质控品工作液和尿液样品各5μL注入高超效液相色谱-串联质谱仪进行检测分析，并记录色谱图和检测样品中索拉非尼，伦伐替尼，瑞戈非尼，卡博替尼，安罗替尼，阿帕替尼，吉非替尼，替万替尼和Galunisrtib的峰面积与内标峰面积；

(7)结果分析：绘制标准曲线和计算曲线回归方程，分别计算出样品中索拉非尼，伦伐替尼，瑞戈非尼，卡博替尼，安罗替尼，阿帕替尼，吉非替尼，替万替尼和Galunisrtib的浓度。

5.根据权利要求4所述的一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，所述步骤(1)中，内标工作液按照按内标准液∶甲醇＝1∶99配制而成。

6.根据权利要求4所述的一种人体尿液抗肝癌酪氨酸激酶抑制剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，所述步骤(5)中的色谱条件为：

色谱柱：Hypersil GOLD VANQUISH C18(2.1×100mm,1.9μm)，

流速：0.3mL/min，

柱温：40℃，

进样量：5μL，

梯度洗脱条件：

质谱条件为：

ESI正离子SRM扫描模式，

喷雾电压：3500V，

鞘气流速：45Arb，

辅助气流速：10Arb，

离子传输管温度：350℃，

雾化温度：400℃，

碰撞气：氩气，

压力：1.5mTor；

Q1/Q3离子通道分别选择为

伦伐替尼:427.1→370.1，312.0amu；

索拉非尼:465.1→252.1，270.1amu；

卡博替尼:502.2→323.1，297.1amu；

瑞戈非尼:483.1→270.1，288.1amu；

阿帕替尼:398.2→212.1，184.1amu；

吉非替尼:447.1→128.1，100.1amu；

安罗替尼:408.2→339.1，304.1amu；

替万替尼:370.1→253.1，158.1amu；

Galunisertib:370.1→336.1，325.1amu。